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背景:近20年来,胰腺癌的发病率和死亡率没有明显下降,预后差,在明确诊断后中位生存期不到6个月。影响预后的主要原因之一是胰腺癌在早期即可发生淋巴转移,而且手术后转移也多发生于淋巴结。淋巴转移的胰腺癌患者平均五年生存率只有0%~7.8%。淋巴转移是影响胰腺癌治疗及预后的重要因素,因而,揭示胰腺癌的淋巴管生成和转移相关分子机制,寻找阻断其淋巴转移的新方法,具有非常重要的临床意义,但目前对胰腺癌中淋巴管生成和发展的机制及其在淋巴转移中的作用远未阐明。
在胰腺癌浸润及转移过程中,微脉管系统的作用不容忽视。对胰腺癌微血管的研究开始较早且较深入,一些抗新生血管疗法也已应运而生;而作为肿瘤及其周围微脉管之一的微淋巴管与肿瘤生长、浸润及转移同样有着密不可分的联系,由于研究方法及微淋巴管特异性标记物的限制对微淋巴管方面的研究起步较晚。肿瘤淋巴管研究的瓶颈在于如何有效地区分微淋巴管与微血管。近年来随着免疫组化、分子生物学技术的发展和应用、特别是一些淋巴管内皮特异性分子标记物(如VEGFR-3、podoplanin、LYVE-1、SLC等)以及与淋巴管形成关系密切的一些生长因子(如VEGF家族、碱性成纤维细胞生长因子、bFGF等)的发现,为淋巴管生成的研究提供了新的工具,对肿瘤淋巴管形成及作用机制的研究起到了极大的促进作用,淋巴管形成及作用机制的研究已成为胰腺癌目前研究的热点之一。
目的:本研究旨在探讨胰腺癌中VEGF-C、VEGF-D与MLVD、MVD及淋巴结转移之间的相关关系,阐明癌周淋巴管增生的机制及意义。
方法:免疫组化检测30例手术切除的胰腺癌组织中VEGF-C、VEGF-D、VEGFR-3、CD34蛋白的表达。VEGFR-3标记微淋巴管,选取5个高倍视野计数,取其平均值计微淋巴管密度(MLVD);CD34标记微血管,记录5个高倍视野内的微血管数,取其平均值计微血管密度(MVD);分别检测肿瘤中心与周边部位的VEGF-C、VEGF-D、MLVD、MVD。RT-PCR检测30例胰腺癌患者中新鲜癌组织及其正常胰腺组织、肝组织、大网膜组织中VEGF-AmRNA、VEGF-CmRNA、VEGF-DmRNA的表达。采用SPSS10.0统计软件对实验数据进行分析,采用卡方检验,以p<0.05为显著性判断标准。
结果:胰腺癌组织VEGF-C、VEGF-D蛋白阳性率分别为73%(22/30)、57%(17/30),肿瘤周边部位显著高于肿瘤中心部位,具有统计学意义(p<0.05);其表达与肿瘤的部位、分化程度、组织学类型无关;与肿瘤的TNM分期有关,Ⅲ~Ⅳ期显著高于Ⅰ~Ⅱ期(p<0.05)。在VEGF-C蛋白阳性组,MVD高于阴性组(p=0.0472),MLVD显著高于阴性组(p<0.01),淋巴结转移发生率增高(p=0.0318)。VEGF-D蛋白阳性组与阴性组相比MVD无显著差异(p=0.07),MLVD明显高于阴性组(p<0.01),淋巴结转移发生率增高(p=0.0179);VEGF-AmRNA,VEGF-CmRNA,VEGF-DmRNA在胰腺癌组织中高表达,在正常胰腺组织、肝组织、大网膜组织低表达(p<0.01);伴有淋巴结转移者,VEGF-AmRNA,VEGF-CmRNA,VEGF-DmRNA在胰腺癌组织高表达(图5)。无淋巴结转移者,仅VEGF-AmRNA,VEGF-CmRNA在胰腺癌组织高表达(图6)。
结论:
1、胰腺癌组织VEGF-C、VEGF-D蛋白阳性组肿瘤的MLVD及淋巴结转移的发生率均显著高于VEGF-C、VEGF-D蛋白阴性组,提示VEGF-C和VEGF-D诱导胰腺癌淋巴管生成,促进胰腺癌细胞淋巴转移。
2、VEGF-C蛋白阳性组MVD高于VEGF-C蛋白阴性组,而VEGF-D蛋白阳性组MVD与VEGF-D蛋白阴性组MVD无明显差异,VEGF-C、VEGF-D蛋白阳性组MLVD均显著高于VEGF-C、VEGF-D蛋白阴性组,提示VEGF-C参与肿瘤血管生成和淋巴管生成的调控,而VEGF-D可能只参与淋巴管生成的调控。
3、VEGF-AmRNA,VEGF-CmRNA,VEGF-DmRNA在胰腺癌组织中表达显著高于相应正常肝组织、胰腺组织、大网膜组织,提示VEGF-C,VEGF-D基因表达对胰腺癌组织微脉管尤其是淋巴管的生成及淋巴转移起着重要影响。