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桃拉综合征病毒(Taura Syndrome Virus,TSV)能感染对虾引发桃拉综合征(Taura Syndrome,TS)。在其主要宿主凡纳滨对虾(Penaeus vannamei)和细角对虾(P.stylirostris)中爆发流行和导致高死亡率。其核衣壳由三个主要结构蛋白有VP1,VP2和VP3(55,40和24kD)和一个次要蛋白VPO(58kD)构成,其中VP1基因是关键的抗原基因。本研究对VP1基因全长及保守区进行了克隆表达,制备了多克隆抗体,并应用多克隆抗体初步探讨了胶体金免疫层析快速检测方法。根据桃拉病毒中国株ZHZC3的全基因组序列,分别设计扩增其主要结构蛋白基因VP1保守区及全长的相应引物,利用RT-PCR技术对目的基因进行了扩增,分别获得了841bp和1552bp的基因片段。再将目的基因与pET-32a(+)载体连接,分别构建高效表达重组载体pET32a-VP1cr、pET32a-VP1。转化大肠杆菌BL21(DE3),重组子经酶切和测序鉴定正确后进行诱导表达。IPTG诱导表达后进行SDS-PAGE电泳检测。结果表明：融合蛋白在37℃下,1.0mmol/L的IPTG浓度诱导下能良好表达,并且,融合蛋白均以包涵体的形式存在。用镍柱纯化包涵体后能获得较纯的融合蛋白。融合蛋白pET32a-VP1cr/VP1经HisTrapTM HP纯化后分别免疫新西兰家兔和ICR小鼠,制备不同种属来源的多克隆抗体。通过ELISA方阵试验,确定pET32a-VP1cr融合蛋白免疫新西兰家兔和ICR小鼠的最佳蛋白包被浓度均为1μg/mL,最佳血清稀释度分别为1：1600和1：3200；融合蛋白pET32a-VP1免疫新西兰家兔和ICR小鼠的最佳蛋白包被浓度分别为1μg/mL和2μg/mL,最佳血清稀释度分别为1：3200和1：12800。方阵滴定后间接ELISA检测血清效价,两种融合蛋白分别免疫ICR小鼠的效价均达到1：25600,新西兰家免的效价达1：102400。用Hitrap Protein G HP柱纯化抗血清获得较纯的IgG。用纯化的兔抗融合蛋白IgG与粗提的TSV进行Western blot试验,在55kD位置出现特异性条带。分别用20nm和30nm的胶体金标记了兔抗pET32a-VP1cr抗体和兔抗pET32a-VP1抗体。采用双抗体夹心法,用20nm胶体金标记兔抗pET32a-VP1cr抗体制成金标抗体结合垫,将鼠抗pET32a-VP1cr抗体喷涂在NC膜组装成了胶体金免疫层析试纸条。阴性对照检测结果成立,检测粗提的TSV,质控线明显显色,检测线显色较淡。