肿瘤性疾病是威胁人类健康的三大杀手之一,其中,恶性肿瘤的病人治愈最低,平均生存时间最短。而恶性肿瘤与良性肿瘤的区别在于,前者通常发生转移,而后者不发生转移。因此,研究肿瘤的转移机制具有重要意义。选择蛋白作为细胞粘附分子中的一个家族,包括L-选择蛋白、P-选择蛋白和E-选择蛋白,它们分别是存在于激活的血管内皮细胞、血小板和白细胞表面的黏附分子。近年来已有大量的证据表明,选择蛋白在肿瘤转移的过程中,可以介导经血液转移的肿瘤细胞与血小板及血管内皮的粘附,促进肿瘤细胞的血道转移与扩散。L-选择蛋白在大部分白细胞表面持续表达,如嗜中性粒细胞、单核细胞、嗜碱性粒细胞、嗜酸性粒细胞,以及大部分的T和B淋巴细胞,其正常功能是作为淋巴细胞到达外周淋巴结的归巢受体。在T细胞杂交瘤中,转移到周围淋巴结的肿瘤细胞通常都有强的L-选择蛋白的表达。在非何杰金淋巴瘤中,肿瘤细胞向周围淋巴结扩散被认为是肿瘤细胞扩散的重要环节,转移到淋巴结中定植地非何杰金淋巴瘤细胞表面有L-选择蛋白的表达,转移到周围组织中定植的淋巴瘤细胞表面则几乎没有L-选择蛋白的表达。Qian等使用了致癌的转基因鼠模型,通过注射肿瘤细胞,发现表达L-选择蛋白的肿瘤细胞才可以转移到周围淋巴结。Borsig等研究发现,内源性表达于白细胞的L-选择蛋白能<WP=5>够在体内影响肿瘤细胞的转移行为,L-选择蛋白的缺陷可以减弱结肠癌的转移,并且在P-、L-选择蛋白双缺陷鼠体内进一步减弱,说明了P-、L-选择蛋白在肿瘤转移中具有协同作用。Hca细胞是我校凌茂英教授从Km小鼠腹水型肝癌细胞株H22中分离出的只经淋巴道转移的细胞株,其中Hca-F为高转移株,接种于615小鼠足垫后有高于80%的转移率,是研究肿瘤细胞经淋巴道转移的理想模型。我们实验室的前期工作表明:Hca-F细胞的上皮组织来源的特征性标志物CK和肝癌细胞的特征性标志物AFP的免疫组化的反应结果均成阳性,Hca-F细胞为上皮组织来源的肝癌细胞,而T淋巴细胞的表面标志CD3和B淋巴细胞的表面标志CD20的抗体与Hca-F细胞的免疫组化的反应结果均成阴性,排除了Hca-F细胞是T或B来源的淋巴瘤细胞的可能。同时用流式细胞术.RT-PCR.Western-blot证实,Hca-F细胞和Hca-P细胞均有L-选择蛋白的表达,Hca-F细胞的表达高于Hca-P细胞,同时L-选择蛋白的表达水平高低与Hca-P细胞和 Hca-F细胞的淋巴道转移潜能正相关。本文选取小鼠肝癌细胞Hca-F为研究对象,以615小鼠为实验动物,采用流式细胞术,分析了小鼠肝癌细胞Hca-F体外培养过程中L-选择蛋白表达的变化,以及其表达水平与转移潜能高低的关系,探讨了L-选择蛋白与肿瘤淋巴道转移力间的相关性。本文的主要工作如下:一.L-选择蛋白在小鼠肝癌Hca-F细胞体外培养过程中表达的变化流式细胞术研究结果表明,Hca-F细胞由大、小两种亚群组成。L-选择蛋白主要表达在Hca-F大细胞亚群的表面。在Hca-F细胞体外培养过程中,第一、二、三代Hca-F培养细胞表面L-选择蛋白的阳性率、荧光强度及其大细胞所占百分比、小细胞所占百分比都无明显变化。Hca-F体外培养细胞从第四代起,其L-选择蛋白表达的阳性率、荧光强度及其大细胞所占百分比都显著下降,小细胞所占百分比显著上升。同时,把L-选择蛋白表达下降的第四、五、六代Hca-F体外培养细胞,经注射回615小鼠腹腔后,再抽取腹水,获得的Hca-F细胞所表达的<WP=6>L-选择蛋白的阳性率、荧光强度及其大细胞所占百分比都显著回升,小细胞所占百分比显著下降。二.小鼠肝癌Hca-F细胞培养过程中其淋巴道转移潜能的变化采用615小鼠足垫接种Hca-F细胞的淋巴道转移动物模型,探讨了Hca-F细胞培养过程中其淋巴道转移潜能的变化。结果表明:第一、二、三代Hca-F体外培养细胞其淋巴道转移能力无明显变化,淋巴结转移率为90%左右,第四、五、六代Hca-F体外培养细胞其淋巴道转移能力明显下降,淋巴结转移率为60%左右,在Hca-F细胞培养过程中,第四、五、六代Hca-F体外培养细胞表达的L-选择蛋白进一步减弱,但其转移能力不再下降。同时把转移能力明显下降的第四、五、六代Hca-F体外培养细胞注射回615小鼠腹腔后,再抽取腹水,从而获得的Hca-F细胞转移能力明显回升。结论:小鼠Hca-F细胞表面L-选择蛋白的表达与其淋巴道转移潜能呈正相关。但是,L-选择蛋白只是引导小鼠Hca-F细胞淋巴道转移的重要因素之一,其它分子机制在肿瘤细胞的淋巴道转移也可能同时发挥作用。