小肽、糖类的毛细管电泳分离研究

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毛细管电泳(CE)是在电泳技术和色谱技术的基础上发展起来的一种分离技术,它具有快速、高效、样品用量少的特点,能用于多种化合物的分离,如氨基酸、肽、蛋白质、甚至整个细胞和病毒颗粒,显示了其独有的优势。此外,毛细管电泳的分离模式灵活多变,方法较为容易,而且操作费用低。毛细管电泳的分支----非水毛细管电泳(nonaqueous capillary electrophoresis,NACE),具有毛细管电泳的优点,相对于水相毛细管电泳,拥有自己独特的特点与优势。其研究范围逐渐扩大,包括多肽、无机离子、聚糖、中性物质、其代谢物的分离等,涵盖了分析应用和基础研究两个方面。由于很多非水溶液的物理性质还不很清楚,并且有机试剂的数目繁多,这些问题给试剂的选择带来一定的困难。今后一段时间研究重点应该是对溶剂系统选择的规律和优化方法的研究。糖广泛存在于自然界和生物体中,一直以来人们认为糖主要是提供能量,但是新兴的糖生物化学研究表明糖类物质还有其它多方面的生物活性与功能。多肽是生命科学中重要的生物大分子物质,是生物体实现其功能的物质基础。多肽、糖类是生命有机体的重要组成部分,研究其毛细管电泳分离对医药、生物、食品、卫生等领域具有重要意义。目前,紫外检测仍是CE中最常用的检测手段,对于肽类和糖类大多数没有或只有微弱的紫外吸收,直接紫外检测满足不了低含量组分测定的要求,化学衍生化法应运而生。本文采用实验室自行合成的新型衍生化试剂,改变被测化合物的特性,进行了肽类物质和糖类物质的毛细管电泳分离,结果令人满意。论文分三章:第一章简单介绍了毛细管电泳的发展及其在医学药物、生命科学、生物技术、法医科学等领域的应用,并对CE分离被分析物的策略及相关基础知识进行了阐述。第二章非水毛细管电泳对小肽衍生物的分离研究,包括两部分:2.1采用咔唑-9-乙基氯甲酸酯(CEOC)作为柱前衍生试剂,采用乙酸-乙酸铵为电解质,甲醇和乙腈混合液为有机溶剂对小肽衍生物进行了分离,实现了4种小肽的基线分离。2.2采用新型衍生试剂2-(11H-苯[a]咔唑)乙基氯甲酸酯(BCEC-Cl)作为柱前衍生试剂,在甲醇和乙腈为溶剂,乙酸-乙酸铵为缓冲体系,毛细管毛细管柱长58.5 cm(有效长度50 cm),20℃,30 kV,压力进样8s,279 nm二极管阵列检测(DAD)条件下,采用非水毛细管电泳模式考察了小肽衍生物的分离条件,实现了5种小肽的基线分离。第三章以1-氨基蒽为衍生试剂,采用毛细管区带电泳模式考察并优化了糖类衍生物的分离条件。在不加任何添加剂的情况下,高效、快速地实现了九种糖的基线分离,并在最优化条件下进行了白刺实际样品的分离分析,结果令人满意。
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