目的脾胃湿热证是临床常见的证候,其在病变过程中存在湿偏重、热偏重及湿热并重等病理变化,在临床诊断上比较困难。本课题通过观察大鼠的一般状态、尿液中的水通道蛋白2(AQP2)、血浆淋巴细胞热休克蛋白70(HSP70)、胃窦P物质(SP)及生长抑素(SS)、胃及十二指肠的病理变化等指标,探讨脾胃湿热证湿、热偏重的本质和它们之间的差异,为脾胃湿热证湿、热偏重的量化提供实验依据;通过观察在三仁汤、白虎加苍术汤的干预下脾胃湿热证湿偏重、热偏重大鼠模型一般状况及一系列实验指标的变化,从不同角度揭示三仁汤、白虎加苍术汤的作用机理。方法1.药物与饲料①附子干姜汤的药物组成:制附子、干姜②三仁汤的药物组成:苦杏仁、法半夏、滑石、薏苡仁、白豆蔻、厚朴、通草、淡竹叶③白虎加苍术汤的药物组成:苍术、粳米、知母、石膏、甘草。高糖高脂饲料:普通饲料中混入12%猪油,8%蜂蜜加工而成。2.分组SPF级SD大鼠40只,随机分为5组,每组8只,雌雄各半,即正常对照组、湿偏重组、三仁汤组、热偏重组和白虎加苍术汤组。3.造模在肥甘饮食、酒伤、湿热环境、病原微生物的综合因素作用下,建立脾胃湿热证的湿偏重型、热偏重型的动物模型:①正常对照组:在20～28℃温度,50%～70%相对湿度的环境下,以普通混合饲料喂养;②湿偏重组:高糖高脂饲料+造模箱+白酒+大肠杆菌;③三仁汤组:高糖高脂饲料+造模箱+白酒+大肠杆菌+三仁汤;④热偏重组:高糖高脂+造模箱+附子干姜煎剂+大肠杆菌;⑤白虎加苍术汤组:高糖高脂+造模箱+附子干姜煎剂+大肠杆菌+白虎加苍术汤。4.观察及检测指标对比观察实验大鼠造模前后的一般状态、体重、肛温、24小时尿量、大便性状等的变化。用ELISA法检测大鼠尿液中的AQP2、流式细胞仪检测血浆淋巴细胞HSP70、放射免疫法检测胃窦匀浆SP及SS的含量。光镜下观察大鼠的胃、十二指肠的病理变化。5.统计学方法用SPSS软件(13.0版)处理,实验结果的数据类型为计量资料,各数据以均数±标准差((?)±s)表示。体重、体温采用重复测量的方差分析进行比较;24小时尿量、AQP2含量、HSP70、SP及SS含量采用One-Way ANOVA对各组实验结果进行方差分析,组间多重比较用LSD法检验,以P＜0.05为有显著性差异。结果1.大鼠的一般状态正常对照组:该组大鼠在喂养4周期间,毛色光泽、食欲好、活动正常,大便正常。湿偏重组、热偏重组:随着造模时间的推移,大部分动物出现倦怠,嗜卧懒动,反应迟钝,毛发蓬松,颜色枯槁;从造模第7天开始,均出现大便溏泻或粘腻,湿偏重组更严重;进入造模箱后,大便溏泻或粘腻症状加重,渐见肛周污秽。三仁汤组、白虎加苍术汤组:大鼠造模后出现与模型组相同的症状,经三仁汤、白虎加苍术汤灌服后,症状有所减轻。2.体重、体温、24小时尿量变化随着造模时间的延长,进入造模箱后4个模型组的体重下降,不同时间点模型组的体重均低于正常对照组(P＜0.01),经三仁汤、白虎加苍术汤的治疗后体重恢复正常增长水平。模型组大鼠进入造模箱后体温升高,灌喂大肠杆菌后体温急剧上升,与正常对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05);经三仁汤、白虎加苍术汤的治疗后体温恢复正常,而湿偏重组、热偏重组体温无显著改善。湿偏重组、热偏重组24小时尿量较正常对照组显著减少(P＜0.01),三仁汤组、白虎加苍术汤组24小时尿量与正常对照组比较差异无显著性差异(P＞0.05)。3.实验室指标检测湿偏重组、热偏重组尿液AQP2的含量显著高于正常对照组(P＜0.01),而且湿偏重组比热偏重组增高显著(P＜0.01)。三仁汤组、白虎加苍术汤组AQP2含量恢复正常水平,与正常对照组比较差异无显著性意义(P＞0.05)。湿偏重组、热偏重组血浆淋巴细胞HSP70表达高于正常对照组(P＜0.01),而且热偏重组比湿偏重组增高显著(P＜0.01)。三仁汤组、白虎加苍术汤组HSP70表达恢复正常水平,与正常对照组比较差异无显著差异(P＞0.05)。湿偏重组、热偏重组大鼠胃窦SP、SS较正常对照组显著降低(P＜0.01);并且湿偏重组SP、SS水平低于热偏重组(P＜0.05)。三仁汤组、白虎加苍术汤组SP、SS含量恢复正常水平,与正常对照组比较无显著差异(P＞0.05)。4.胃、十二指肠病理切片正常对照组胃粘膜层可见少量炎症细胞,粘膜下层无组织水肿,十二指肠绒毛上皮较完整。湿偏重组、热偏重组大鼠胃及十二指肠病理切片无较大差异,均可见:(1)胃粘膜层有大量中性粒细胞、嗜酸性粒细胞浸润,血管扩张充血;胃粘膜下层组织水肿,中性粒细胞、嗜酸性粒细胞浸润显著;(2)十二指肠可见绒毛上皮细胞脱落,大量炎症细胞渗出。三仁汤组、白虎加苍术汤组切片均可见胃粘膜层炎症细胞减少,血管无扩张充血,粘膜下层无组织水肿,十二指肠绒毛上皮较完整,仅见少量炎症细胞浸润。结论实验结果显示,在肥甘饮食、湿热环境、病原微生物、酒伤、内湿、热的综合作用下,可成功复制脾胃湿热证的湿偏重型、热偏重型的动物模型。湿偏重组、热偏重组尿液AQP2的含量增高,而且湿偏重组比热偏重组增高显著,可见其向外利水的生理作用出现异常;AQP2可作为脾胃湿热证“湿”的形成、“湿”的量化的一个重要指标。湿偏重组、热偏重组血浆淋巴细胞HSP70表达显著增加,而且热偏重组比湿偏重组增高显著;这表明大鼠在复合因素的作用下,机体处于自我调节、自我保护状态,HSP70可作为量化脾胃湿热证湿、热偏重的重要指标之一。湿偏重组、热偏重组大鼠胃窦SP、SS含量降低,湿偏重组SP、SS水平更低于热偏重组;SP、SS的含量能客观地反映胃肠功能的状态,这亦能解释湿偏重证、热偏重证临床所表现的消化系统症状。湿偏重组、热偏重组大鼠胃、十二指肠出现炎症病变,表明脾胃湿热证临床所表现的症状是有其形态结构基础的。三仁汤、白虎加苍术汤可能存在以下作用:1)能恢复由复合因素所致的湿偏重证、热偏重证动物模型的一般状态;2)调节尿液中AQP2的含量,恢复机体正常的向外利水功能;3)降低热应激所导致的HSP70增高的作用;4)调节机体胃窦中SP、SS的水平;5)部分修复模型组大鼠胃、十二指肠的组织结构的功能。