糖尿病模型大鼠胃电异常与ENS、ICC病理损害及中药“脾胃康”作用研究

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糖尿病(diabetes mellitus,DM)为最常见的内分泌代谢疾病。该病由胰岛素合成与分泌减少,或胰岛素受体及受体后缺陷引起,高血糖是其生化特征,并有不同程度的糖、蛋白质和脂肪代谢紊乱,尚能致残、致死。流行病学研究发现,我国糖尿病的发病率近年呈上升趋势。我国的第二次卫生革命已将糖尿病作为重点防治的四大慢性病之一。 糖尿病性胃轻瘫(Diabetic gastroparesis,DGP)定义为胃排空极度延缓及相关胃动力异常。国外有调查报道,50%~76%糖尿病病人合并胃轻瘫。北京协和医院的调查亦显示,约50%的糖尿病患者有胃动力紊乱表现。近年,糖尿病胃动力障碍已引起国内外学者和临床医生的重视,并成为研究热点。 目前认为,引起DGP胃排空极度延缓的动力障碍机制包括胃电节律紊乱,胃体紧张性下降,胃窦收缩推进力减弱,幽门异常紧缩,以及胃窦-十二指肠运动失调等。而胃平滑肌、壁内神经(Enteric nervous system,ENS)、Cajal间质细胞(interstitiai cells of Cajal,ICC)和血管组织与超微结构改变,以及ICC在神经-平滑肌信号传递作用的异常,则可能是DGP发生的重要病理基础。 祖国医学将糖尿病归属“消渴病”、“消瘅”范畴。先前有学者认为,糖尿病主要以阴虚为本、燥热为标。近年有临床研究表明,患者的体质是消渴病发生的重要因素。临床观察发现,除属气阴两虚证以外,许多消渴病患者可因素体脾虚,或长期烦劳、饮食不节伤及脾胃,而成脾胃气虚之证,患者多有气机升降失调,或兼湿浊内停症状。因此,消渴病的发病与脾胃气虚关系密切。 糖尿病胃轻瘫的典型消化道症状为早饱、厌食、嗳气、恶心、呕吐、腹胀等,其症状严重程度因人而异。这与中医“胃痞”相一致。其病理基础以脾胃虚弱、运化无力为主,升降失司、胃失和降导致气滞、湿浊或食积停滞为标;此外,气虚常致气滞血瘀,瘀再促虚,恶性循环。因此,糖尿病胃轻瘫属本虚标实之证。 因而,治疗糖尿病胃轻瘫属脾胃气虚兼有气滞血瘀湿浊证者,应予具有健脾理气、活血化瘀作用的方药。尚可结合临床所见肾阳虚与胃阴虚表现,适当加用益肾、养胃的中药。中药复方“脾胃康”是“糖尿病胃肠动力障碍研究协作组”,根据DGP发病机制及中医治则研制并使用的经验方,临床应用疗效显著。在我们的中药复方“脾胃康”中,白术、苏梗健脾理气,为君药;麦冬、巴戟养阴益肾、调节阴阳,为臣药;柴胡、丹参、赤芍疏肝活血化瘀,为佐。诸药合用,主要具有健脾理气、活血化瘀及调节阴阳之功效。为进一步探讨DGP的发生发展机制,以及“脾胃康”治疗DGP的作用机理,我们设计本实验研究。一 实验研究 目的 大部分糖尿病胃轻瘫患者有明显的胃动力障碍。而胃电是间接观察胃动力状况的指标之一。本文观察实验性糖尿病模型大鼠的胃电异常、胃平滑肌、壁内神经及ICC的病理损害,观察健脾理气活血中药复方“脾胃康”对上述指标的作用。以探讨糖尿病胃动力障碍的病理与病理生理基础,并初步说明“脾胃康”防治糖尿病胃轻瘫的作用机制。 材料与方法 清洁级雄性孤 大鼠u0只,体重170 土7g(55-19Ug),分两批。一批60只大鼠,麻醉开腹,在胃窦部埋植单根针形银电极。动物10天后创伤愈合的55只,随机抽取40只用于制作糖尿病模型,在禁食12h后一次腹腔注射浓度 0.lmol几的柠檬酸缓冲液链腺佐菌素GTZ人剂量55myk巳其余 15只大鼠为对照组。STZ注射2天后,连续3天在非禁食情况剪尾取血,并应用美国Johnson&J。hns。n公司hkh。nONE TOUCH血糖计狈血糖;以血糖>N恤。1/L视为糖尿病造模成功。 糖尿病造模成功并存活的大鼠,随机分为模型0M)组 15只,模型+中药(DM+TCM)组15只。另一批70只不埋植电极,分组与造模同前。DM+TCM组大鼠在造模后第5天起,以中药复方“脾胃康” 每日灌胃1次,每次1.5ml。DM组和对照组大鼠每日灌服1.5ml生理盐水一次。普通颗粒饲料喂养,自由饮水。实验观察2个月。 埋植胃电极的三组大鼠,每只隔天以成都泰盟BL-410型生理机能实验系统记录胃电1次,每次记录约10min,参数设置时间常数ss,高频滤波100Hi,X轴速度2.56s川iv。胃电指标采用慢波频率(周/min,cpmL 波幅和峰电发生率(半定量);慢波频率尚计算其变异系数(coefficient of variation,CV%)和异常节律指数(Abnormal rhythm index,ARI%)。CV%指慢波频率标准差占均值的百分比。ARI%指节律异常时间占记录总时程的百分比。 实验完毕后,全部大鼠拉颈处死,检查所埋电极的情况,并开腹取胃,分别作胃纵肌-神经铺片、石蜡包埋切片,或饿酸固定包埋半超薄切片,作HE染色,NOS组化染色,碘化锌-饿酸组化染色,nNOS免疫组化染色,或抗c-kit单抗免疫组化染色。光镜或电镜观察胃平滑肌、壁内神经、ICC的数量、分布及超微结构。图像输入图像处理系统计算有关阳性物质的面密度。数据以 SPSS 0.0软件作统计处理。 结果①全部造模大鼠腹腔注射STZ后第7天,除死亡外,其余大鼠的血糖均高?
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