上皮间质转化在TGF-β1联合TNBS诱导克罗恩病肠纤维化模型中的作用研究

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目的:建立TGF-β1联合TNBS诱导的大鼠克罗恩病肠纤维化模型,研究肠上皮间质转化(EMT)在克罗恩病肠纤维化中的作用。  方法:将Sprague-Dawley(SD)大鼠30只随机分为2组,模型组20只,对照组10只。模型组大鼠予距肛门8cm处注入1ml含有2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)30mg及99%乙醇0.4ml,倒立30秒后,让大鼠恢复24小时,然后距肛门4cm处灌入500μl含1×109pfu/ml滴度Adeno-TGF-β1的PBS(Ph7.4)。对照组大鼠不做处理。通过观察大鼠一般情况、体重、肠大体病理、组织病理来评价克罗恩病大鼠纤维化模型构建效果。利用免疫组化检测肠EMT标志物(E-cadherin、cytokeratin-18、Vimentin、α-SMA)表达变化,分离肠黏膜上皮细胞,提取总RNA与总蛋白,通过RT-PCR及Western blot检测EMT相关标志物(E-cadherin、Vimentin、α-SMA、cytokeratin-18、Snail)的表达情况。  结果:TGF-β1联合TNBS诱导的大鼠克罗恩病肠纤维化模型对肠道炎症与纤维化的模拟效果与对照组相比有显著性差异。免疫组化结果显示模型组较对照组Vimentin、α-SMA表达显著上升,而E-cadherin、cytokeratin-18表达显著下降。RT-PCR、Western blot均提示模型组较对照组Vimentin、α-SMA、Snail表达水平显著增高,而E-cadherin、cytokeratin-18表达水平显著下降。  结论:肠上皮间质转化在TGF-β1联合TNBS诱导的克罗恩病模型中肠纤维化形成发挥显著性作用。
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