论文部分内容阅读
目的：建立冲突性心理应激所致大鼠睡眠障碍的大鼠模型并阐明其中枢5-HT机制。方法：1.大鼠冲突性心理应激模型的复制采用Vogel`s饮水冲突模型的改良方法,复制大鼠冲突性心理应激模型,并对造模后大鼠体质量、血清皮质酮浓度、以及在旷场迷宫中的行为学参数进行测定,进而确定冲突性心理应激模型复制成功的标准。2.冲突性心理应激大鼠睡眠时相和睡眠节律的变化采用大鼠皮层脑电描记技术,通过对大鼠脑电(EEG)和肌电(EMG)的监测,来考察冲突性心理应激对大鼠睡眠时相和睡眠节律的影响。3.冲突性心理应激所致大鼠睡眠障碍的中枢5-HT机制3.1冲突性心理应激大鼠中枢不同脑区睡眠相关神经递质含量的变化运用酶联免疫吸附法对冲突性心理应激大鼠睡眠和应激相关脑区(下丘脑、杏仁核和中缝核)5-HT、色氨酸羟化酶(TPH)、5-羟吲哚乙酸(5-HIAA)的含量进行测定,并推算出5-HIAA/5-HT的比值。3.2腹腔注射五羟色胺酸(5-HTP)对冲突性心理应激大鼠睡眠时相的影响给大鼠腹腔注射5-HT合成的前体物质5-羟色氨酸(5-HTP),通过对大鼠EEG和EMG的监测,考察5-HTP对冲突性心理应激大鼠睡眠时相和睡眠节律的影响。3.3冲突性心理应激大鼠外周血清中色氨酸浓度的变化采用高效液相色谱法测定冲突性心理应激大鼠外周血中色氨酸的浓度。3.4腹腔注射舍曲林对冲突性心理应激大鼠睡眠结构的影响考察神经突触前膜5-HT回吸收的抑制剂舍曲林对冲突性心理应激大鼠睡眠时相和睡眠节律的影响。3.5冲突性心理应激大鼠杏仁核部位S1c6a4基因和Htr1a基因表达的变化应用定量PCR技术考察冲突性心理应激对大鼠杏仁核部位5-HT转运体编码基因(S1c6a4)和5-HT1A受体编码基因(Htr1a)表达的影响。结果：1.大鼠冲突性心理应激模型的复制与空白组相比,模型组大鼠造模7d后,血清中CORT浓度显著升高(P<0.05),体质量显著性减少(P<0.05),在旷场迷宫中穿格数、直立次数和理毛次数明显减少(P<0.05),而排便次数显著增加(P<0.05)。2.冲突性心理应激大鼠的睡眠时相和睡眠节律的变化与空白组相比,模型组大鼠睡眠的LS、SWS、REM以及睡眠总时间都有不同程度的减少(P<0.05),除REM外其他各期所占睡眠总时间的比例均有不同程度的变化(P<0.05),且每个睡眠时相持续时间明显缩短,睡眠时相间的切换十分频繁,睡眠趋于零散化。3.冲突性心理应激所致大鼠睡眠障碍的中枢5-HT机制3.1冲突性心理应激大鼠中枢不同脑区睡眠相关神经递质含量的变化造模后大鼠中缝核部位、杏仁核部位以及下丘脑区的5-HT浓度显著降低(P<0.05)。中缝核部位和杏仁核部位的TPH浓度显著降低(P<0.05),TPH在下丘脑部位虽然有下降的趋势,但是与空白组相比无显著性差异(P>0.05)。模型组大鼠杏仁核部位和下丘脑部位的5-HIAA浓度显著降低(P<0.05),中缝核部位虽然有下降的趋势,但是和空白组相比无显著性差异(P>0.05)。由5-HIAA/5-HT的比值可以看出,模型组大鼠中缝核部位5-HIAA/5-HT的比值显著降低(P<0.05),而杏仁核部位和下丘脑区5-HIAA/5-HT的比值虽然有下降的趋势,但是与空白组相比,无显著性差异(P>0.05)。3.2腹腔注射五羟色胺酸(5-HTP)对冲突性心理应激大鼠睡眠时相的影响相对于模型组,5-HTP组大鼠睡眠总时间、LS、SWS和REM睡眠持续时间均显著延长(P<0.05),5-HTP组大鼠LS所占的比例显著减小(P<0.05),而SWS所占的比例显著增加(P<0.05),REM所占的比例基本不变(P>0.05)。且5-HTP组大鼠各个睡眠单元持续时间显著地延长,各睡眠时相之间的切换次数也有所减少,睡眠相对连续、集中。3.3冲突性心理应激大鼠外周血清中色氨酸浓度的变化与空白组相比,冲突性心理应激大鼠血清中的色氨酸水平明显降低(P<0.05)3.4腹腔注射舍曲林对冲突性心理应激大鼠睡眠结构的影响与模型组相比,舍曲林组大鼠睡眠总时间、LS、SWS和REM睡眠持续时间均显著延长(P<0.05),LS所占的比例显著减小(P<0.05),而SWS所占的比例显著增加(P<0.05),REM所占的比例与模型组大鼠相比变化不明显(P>0.05),大鼠的各个睡眠单元持续时间显著延长,各睡眠时相之间的切换次数也有所减少,睡眠趋于相对连续、集中。3.5冲突性心理应激大鼠杏仁核部位S1c6a4基因和Htr1a基因表达的变化与空白组相比,冲突性心理应激模型大鼠杏仁核部位的S1c6a4基因的表达明显升高,而杏仁核部位的Htr1a基因的表达量则有所降低。结论：冲突性心理应激对大鼠睡眠时相和睡眠节律造成显著影响,其影响的作用机制与降低中枢部分脑区5-HT的浓度和5-HT能神经系统的兴奋性、减少中枢5-HT的合成,促进神经突触间隙5-HT的回吸收以及减少突触后膜5-HT1A受体有关。