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目的通过检测“七叶一枝花-壳聚糖”混合物对小鼠成纤维细胞L929的细胞毒性、细胞周期和凋亡的影响及对金黄地鼠口腔黏膜的刺激性,评价其生物相容性,为临床探索新的义齿稳固剂提供实验依据。方法1“七叶一枝花-壳聚糖”混合物及浸提液的制备:将经水煎法提纯的七叶一枝花粉剂0.156g溶于100ml纯水中搅拌溶解,在连续搅拌下缓慢加入经γ射线消毒后的水溶性壳聚糖2g,搅拌混匀后得到浅棕色透明混合物,每次实验均需配制新溶剂。以含10%胎牛血清的RPMI1640完全培养基为浸提介质,将“七叶一枝花-壳聚糖”混合物按0.1g/ml的标准放入浸提介质中,37℃条件下、浸提24h。2L929细胞培养及绘制细胞生长曲线:细胞复苏后,用含10%胎牛血清的RPMI1640培养基在37℃、5%CO2的培养箱中培养细胞并传代。将细胞制成10种不同浓度的细胞悬液接种于96孔板进行培养,分别在培养24h、48h、72h、96h、120h、144h和168h后用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测其光密度值(OD值),根据各组均值绘制细胞生长曲线。3 MTT实验:用根据细胞生长曲线确定的最佳细胞浓度接种96孔板,MTT比色法测定不同浓度“七叶一枝花-壳聚糖”混合物的浸提液培养L929细胞24h、48h、72h和96h的OD值,统计分析不同浓度浸提液在不同时间对L929细胞增殖的影响。4细胞周期实验:利用流式细胞仪检测阴性对照组、“七叶一枝花-壳聚糖”混合物浸提液组培养细胞48h后L929细胞周期的差异。5细胞凋亡实验:阴性对照组、“七叶一枝花-壳聚糖”混合物浸提液组培养细胞48h后,分别对细胞进行Annexin V,PI双染色,利用流式细胞仪测定各组的细胞凋亡率。6口腔粘膜刺激试验:制备“七叶一枝花-壳聚糖”混合物及浸提液,10只金黄地鼠随机分为实验组和对照组,分别将浸有“七叶一枝花-壳聚糖”混合物的浸提液、p H为2的醋酸和生理盐水的棉球置于地鼠中央颊粘膜极低处,分别于1h、4h、6h、8h后肉眼观察动物有无不良反应;8h后处死动物,取与试样接触部位颊粘膜及周围结缔组织,常规组织切片,HE染色观察组织细胞有无炎性反应。结果1细胞生长曲线结果:通过细胞生长曲线的绘制可知,本实验室条件下L929细胞在第三天进入对数生长期,第五天达到增殖顶峰,第七天进入生长平台期,细胞生长曲线呈“S”形,细胞的最适生长浓度为4×104/ml。2 MTT实验结果:实验条件下,第一天,毒性级别除100%实验组为0级外,浓度25%、50%、75%、100%实验组及Protefix组均为1级;第二天、第三天和第四天,浓度25%、50%、75%、100%实验组和Protefix组均出现1级毒性反应,有极轻微细胞毒性。3细胞周期实验:48h后细胞表现出不同的生长趋势,两组细胞均为正常二倍体细胞。“七叶一枝花-壳聚糖”混合物浸提液组G2期细胞周期比例为(7.95±0.58)%,阴性对照组G2期细胞周期比例为(8.20±0.32)%,两组间差异无统计学意义(P>0.05),细胞相容性良好。4细胞凋亡实验:“七叶一枝花-壳聚糖”混合物浸提液组早期凋亡率为(5.97±0.71)%,阴性对照组早期凋亡率为(5.90±1.16)%,两组间差异无统计学意义(P>0.05)。5口腔粘膜刺激试验:肉眼观察实验组与阴性对照组棉球接触部位黏膜均未出现红斑、糜烂、溃疡;阳性对照组棉球接触部位黏膜粗糙,白色皱褶,周围组织红肿。组织学检查,实验组与阴性对照组上皮完整,无炎细胞浸润、无水肿及血管充血;阳性对照组黏膜上皮可见水肿、脓肿、糜烂及慢性炎细胞浸润等病理改变;固有层可见水肿,血管扩张、充血及灶性慢性炎细胞浸润。结论1本实验条件下,自制“七叶一枝花-壳聚糖”混合物对体外培养的L929细胞的增殖无毒性作用。2与阴性对照组相比,“七叶一枝花-壳聚糖”混合物对L929细胞周期和凋亡的影响无显著性差异。3“七叶一枝花-壳聚糖”混合物对金黄地鼠口腔黏膜无刺激性。说明“七叶一枝花-壳聚糖”混合物具有良好的生物相容性。