皮肤软组织扩张术因其在组织修复与重建方面的临床应用范围广，早已成为整形外科最为常用的治疗手段之一，但也存在治疗周期较长、扩张后的皮肤质地改变、回缩率高等缺点。如何在较短的治疗周期内扩张获得面积大并且质地好的皮肤就成了基础研究努力的方向。本论文的第一部分介绍应用自行改良设计扩张器构建大鼠皮肤软组织扩张模型的实验方法，并结合HE染色和PCNA免疫组织化学染色结果证明其扩张效果。希望能为研究扩张皮肤的新生机制提供一个良好、成熟、稳定的皮肤软组织扩张动物模型。本论文的第二部分介绍不同扩张时期皮肤胶原纤维变化的规律，通过Masson染色和天狼星红染色，观察皮肤中的胶原纤维在不同扩张阶段的变化趋势和规律，探索扩张后皮肤回缩率高及部分患者扩张后皮肤有类似“妊娠纹”样外观的原因所在；为后续研究如何通过改变扩张方式或添加人工干预因素调控胶原类型变化、降低扩张后皮肤的回缩率提供一个研究基础。本论文的第三部分介绍真皮干细胞在扩张皮肤新生中作用的实验假设与初步探索，探索扩张皮肤组织中真皮部分的新生机制，为研究如何促进扩张皮肤新生奠定一定的实验基础。第一部分应用自行改良设计扩张器构建大鼠皮肤软组织扩张模型目的：采用自行改良设计的短注射导管枕形扩张器构建大鼠皮肤软组织扩张模型，并探讨扩张模型产生的扩张应力对皮肤细胞增殖的影响，证明其扩张效果，为皮肤软组织扩张的基础研究提供一个良好、稳定的动物模型。方法：将SD大鼠按每组30只，随机分为A、B两组；A组应用自行改良设计的枕形扩张器，B组应用威宁公司生产的常规扩张器，在大鼠颈部做切口、埋置扩张器，注射壶外置，构建皮肤扩张模型。分别在扩张后第1、2、3、4、5周采集A组大鼠扩张中心部位的皮肤和正常未扩张的皮肤作为组织标本。HE染色、镜下观察不同扩张时期皮肤组织结构在扩张应力刺激下发生了哪些改变；依据增殖细胞为PCNA+细胞，进行免疫组化染色观察扩张应力刺激对皮肤细胞增殖产生的影响。结果：A组应用改良扩张器构建的扩张模型中，外置的注射壶术后不易被鼠咬掉，且扩张囊注水及术后护理更为简便，模型构建的稳定性明显高于B组。HE染色观察：扩张应力作用下，皮肤表皮层变厚、真皮层变薄；PCNA免疫组化染色结果发现：增殖细胞（PCNA+细胞）呈点状散在分布于表皮的基底层及毛囊鞘周围，PCNA+细胞数目在扩张后的第3周达到最高峰。结论：自行改良设计的扩张器，是一种更适用于构建大鼠扩张动物模型的实验材料；其产生了有效的扩张应力刺激，对大鼠的皮肤组织结构及皮肤细胞的增殖产生了影响。第二部分不同扩张时期皮肤胶原纤维变化规律的研究目的：通过实验分析不同扩张时期皮肤中，单位面积内胶原纤维含量的变化，以及I型和III型胶原纤维所占比例发生了怎样的变化，并与正常未扩张皮肤中的胶原纤维特征进行比较，总结扩张过程中皮肤胶原纤维的变化规律。方法：选择动物实验中不同扩张时期（扩张后第1到5周）的皮肤组织和正常未扩张的皮肤组织作为标本，进行Masson染色和天狼星红染色，分别在光学显微镜和偏振光显微镜下观察并拍照，用Image-ProPlus6.0图像分析软件进行统计分析。结果：与正常未扩张的皮肤组织进行比较，扩张后的皮肤组织中单位面积内胶原纤维的含量降低，排列疏松；I型胶原纤维所占比例下降，III型胶原纤维所占比例升高。结论：单位面积内胶原纤维含量的降低及I型和III型胶原纤维所占比例的变化可能是扩张后皮肤质地发生变化、回缩率高的主要原因。第三部分真皮干细胞在扩张皮肤新生中作用的实验假设与初步探索目的：通过本部分的实验假设和初步探索，探究真皮干细胞在扩张应力作用下发生增殖分化的方向，希望能够了解扩张皮肤组织中真皮部分的新生机制，为研究如何促进扩张皮肤新生奠定实验基础。方法：Brdu活体标记新生SD鼠皮肤中的成体干细胞，在5周龄时构建皮肤软组织扩张模型，取正常未扩张和扩张后第1-5周的皮肤组织作为标本，拟进行PCNA免疫荧光染色、Brdu免疫荧光染色和两者的双标共定位免疫荧光染色。并通过Brdu标记体外培养的293T细胞进行免疫荧光染色，检验我们购买的抗体和染色技术。结果：在扩张后的皮肤组织中能够明显观察到绿色荧光的PCNA+细胞，PCNA+细胞的数目明显比未扩张的皮肤组织中数量增多。在正常未扩张的皮肤组织中能够观察到少量呈绿色荧光的Brdu+细胞，但在扩张后的皮肤组织中尚未发现Brdu+细胞。Brdu标记293T细胞进行免疫荧光染色，Brdu+细胞占细胞总量的85%左右（表明购买的抗体、试剂具有较高的特异性，不会影响活体标记和组织学的染色；）。结论：对于正常未进行皮肤软组织扩张的动物，Brdu可以作为皮肤干细胞的标记试剂；但在扩张应力刺激下，皮肤中成体干细胞的静息状态可能就被破坏了，使得标记细胞随着传代速率加快，发生标记衰减的速度太快，无法通过免疫荧光染色检测到。