论文部分内容阅读
杜仲(Eucommia ulmoides Oliv.)是我国名贵滋补药材。杜仲中含有木脂素类、环烯醚萜类及黄酮类等多种化学成分,具有调节血压血脂、抑制肿瘤细胞等药理作用。杜仲总木脂素有效部位具有明显的舒张血管作用,其中,松脂醇二葡萄糖苷(Pinoresinol Diglucoside,PDG)属于双环氧木脂素类,是杜仲降血压的主要成分。本论文通过研究杜仲样品采集后的干燥方法及不同采收期的杜仲皮中的总木脂素及PDG的含量变化,确定了较优的干燥方法及杜仲皮的最佳采收期。进而,对杜仲总木脂素及PDG的提取纯化工艺进行了系统的研究。研究内容结果如下:(1)研究了杜仲总木脂素、PDG、绿原酸(Chlorogenic Acid,CA)、京尼平苷酸(Geniposidic Acid,GPA)、总黄酮和桃叶珊瑚苷(Aucubin,AU)等多种活性成分的检测方法。具体如下:变色酸比色法测定杜仲总木脂素,检测波长525nm。高效液相色谱检测方法定量检测杜仲PDG,检测条件为:色谱柱为DimamonsilC18(250mm×4.6mm,5μm);进样体积为20μL;温度为25℃;流动相:V(乙腈)︰V(0.05%磷酸)为15︰85;检测波长λ为228nm;流速1.0mL/min。薄层层析法定性检测杜仲PDG,展开剂:氯仿︰甲醇(V︰V)为7:3。显色剂:10%的变色酸,浓硫酸。高效液相色谱法测定绿原酸、京尼平苷酸。硝酸铝-亚硝酸钠比色法测定总黄酮和对二甲氨基苯甲醛显色法测定桃叶珊瑚苷。(2)研究了杜仲皮及叶鲜样的干燥方法及不同采收期的杜仲皮中总木脂素和PDG的含量变化情况。分别采用5种方法对杜仲皮和叶进行干燥,并研究这些方法对杜仲皮及叶中的PDG、绿原酸、京尼平苷酸、总黄酮和桃叶珊瑚苷含量的影响。结果表明:微波杀青后50℃烘干处理杜仲皮及叶能够有效的减少活性成分的损失,是一种比较好的干燥方法。经过此法处理后,杜仲叶中绿原酸、总黄酮和桃叶珊瑚苷的含量分别为2.129%、7.005%和4.420%,分别是晒干处理的5.14倍、1.52倍和17.06倍;杜仲皮中PDG、京尼平苷酸和桃叶珊瑚苷的含量分别为0.4420%、5.393%和4.242%,分别是晒干处理的4.70倍、1.09倍和1.78倍。5月份采集的杜仲皮可作为提取杜仲总木脂素及PDG的原料。此时,树液流畅,皮部与木质部最宜分离,采皮后杜仲皮的再生效果好,且杜仲总木脂素及PDG的含量较高,分别为8.910%和0.3500%。(3)研究了杜仲总木脂素及PDG的超声和纤维素酶法辅助提取工艺。首先,以杜仲总木脂素的提取率为指标,研究得到杜仲总木脂素的最佳超声和纤维素酶法辅助提取工艺参数。再分别测定、比较上述最佳提取工艺条件下的PDG的得率,以确定杜仲PDG的最优提取方法。结果杜仲总木脂素的最佳超声提取工艺:使用体积分数为65%的乙醇,液料比(mL:g)20:1,浸泡12h后,超声辅助提取45min,提取1次。在此实验条件下,杜仲总木脂素的得率为7.652%,提取率为97.78%,PDG的得率为0.3050%;杜仲总木脂素的最佳纤维素酶法提取工艺:使用pH为4的水溶液,液料比(mL:g)15:1,浸泡12h后,加入经40℃活化10min后的纤维素酶0.7%,在60℃水浴中酶解3h,提取1次。在此实验条件下,杜仲总木脂素的得率为8.309%,提取率为93.27%,PDG的得率为0.1060%。结果表明,采用超声辅助提取所得杜仲总木脂素的得率较酶法提取的低,而超声提取的杜仲PDG得率却高于酶法提取。(4)研究了杜仲总木脂素及PDG的纯化方法。采用大孔吸附树脂-C18反相硅胶柱层析-正相硅胶柱层析联用技术,对杜仲总木脂素及PDG进行纯化研究。以吸附量和解吸率为指标,筛选出适合纯化杜仲总木脂素的AB-8树脂,并研究了杜仲总木脂素的吸附动力学、吸附热力学、穿透曲线和洗脱曲线。研究表明,经AB-8树脂一次纯化,可以制得含量为71.61%的杜仲总木脂素有效部位以及含量为8.070%的PDG粗品。再经C18反相硅胶柱层析纯化,得到含量为53.12%的PDG。最后通过正相硅胶柱层析进一步纯化,得到含量为91.50%的PDG产品。