新城疫(Newcastle Disease,ND)是由新城疫病毒(Newcastle Disease Virus,NDV)引起的一种高度接触性的烈性传染病。禽类感染NDV后以呼吸道、消化道和中枢神经系统损伤为主要特征。该病呈世界性分布,给养禽业造成了巨大的经济损失。除了强制免疫,对新城疫的定期监测是防控该病的另一重要方面,由此也产生了大量的检测工作。传统的NDV检测技术包括血清学技术如HA-HI、ELISA,分子生物技术如RT-PCR等。然而这些技术存在着一些不足的地方,如实验操作步骤较为冗杂、需时较长、价格昂贵、非特异性因素的干扰等。因此亟待建立一种操作简单、快速、灵敏、无损的高通量检测方法。表面增强拉曼光谱技术(Surface Enhanced Raman Spectroscopy,SERS)可使分子的拉曼信号增强1014~1015倍,是一种无损、快速、特异、灵敏的检测技术,可以提供明确的分子结构和物质成分信息,为建立病毒检测方法提供了新的思路。本文结合拉曼光谱技术和免疫学,首次建立SERS新城疫病毒的检测方法。本研究基于抗原抗体特异性识别并结合的原理,通过拉曼标记的免疫探针溶液检测新城疫病毒。将新城疫病毒固定在硝酸纤维素膜(Nitrocellulose membranes,NC membranes)上,制备antibody-DSNB-AuNP免疫探针捕捉NC膜上固定的抗原,形成“抗原-免疫探针”半三文治结构复合物。通过对免疫探针中υs(NO2)拉曼峰的识别,实现对NDV的检测。本研究探索了试验实施的条件如积分时间、功率、纳米金颗粒规格、封闭时间和探针孵育时间。测定优化条件后检测方法的特异性、灵敏度,并与常规检测NDV方法的优点及缺点进行比较。最后评估本研究建立的SERS检测法的优点及缺点。本研究结果表明,运用SERS检测NDV的LOD(Limit of detection)值为2logTCID50,在2 logTCID50~7 logTCID50范围内,υs(NO2)的强度与病毒滴度成线性相关,线性回归符合y=397.94x-808.97,相关系数R2为0.9859。意味着SERS检测法能够在一定范围内实现NDV定性及定量的测定。滴度为7 logTCID50~2 logTCID50的病毒液,其拉曼测试υs(NO2)的强度值,同一滴度组内CV(变异系数,Coefficient of Variation)值分别为5.16%、4.97%、6.40%、11.17%、19.24%、62.23%。应用本文建立的SERS检测法对不同基因型的新城疫毒株进行检测,均诊断为NDV阳性;而对其他禽类病毒和细菌的诊断结果为NDV阴性。整个诊断用时少于2 h。上述数据说明本试验具有较好的稳定性、灵敏度和特异性。本试验条件优化结果为:积分时间4 s、纳米金颗粒(60±5)nm、测试功率40 mW、封闭时间45 min、探针孵育时间60 min。SERS检测法操作简便、快速,减少了筛查新城疫病毒的工作量。这是国内外首次应用SERS技术检测新城疫病毒的研究,填补了SERS技术检测新城疫病毒的空白,为往后SERS技术检测多种禽类病毒提供参考依据。