hTERT与p16在甲状腺乳头状癌中的表达及意义

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目的:探讨hTERT、 p16的基因及蛋白在人类甲状腺乳头状癌(Papillary Thyroid CarcinomaPTC)中的表达及其生物学意义,为进一步研究它们之间存在的相关性奠定理论基础。  方法:收集2012年1月~2012年7月间台州市立医院肿瘤外科手术切除的标本。其中甲状腺乳头状癌标本39例,同时取癌旁甲状腺组织标本为对照组,且均经病理证实。取标本时均获得患者本人或者亲属同意,所有患者在术前并未接受过化疗或放疗。  (1) hTERT和p16 mRNA在甲状腺乳头状癌及癌旁组织中的表达检测:采用RT-PCR(reverse transcription—polymerase chain reaction, RT-PCR)法检测hTERT和p16mRNA在甲状腺乳头状癌组织及癌旁甲状腺组织中的表达情况。结果采用相对定量方法2-ΔΔCt计算。采用配对t检验分析计量资料,P<0.05差异具有统计学意义。  (2): hTERT与p16蛋白在甲状腺乳头状癌组织及癌旁组织中的表达检测:采用组织免疫荧光方法检测hTERT蛋白表达情况,并进行相关临床资料分析;免疫组织化学方法检测p16蛋白表达情况;进行实验结果整理、统计学分析,计数资料比较采用卡方检验,P<0.05差异具有统计学意义。Western-blot方法对比研究甲状腺乳头状癌及癌旁组织对照组中hTERT及p16蛋白表达水平,标准内参做参照,使用Image Quant Las凝胶成像分析处理,计量资料结果进行t检验,P<0.05差异具有统计学意义。  结果:RT-PCR检测结果显示,与癌旁组织相比人类甲状腺乳头状癌组织中hTERT mRNA的相对表达量为1.5160±0.016(P<0.05),差异具有统计学意义;p16 mRNA在人类甲状腺乳头状癌组织中的表达明显低于癌旁组织,相对表达量为0.268±0.031(P<0.005),差异具有统计学意义;组织免疫荧光结果显示hTERT在癌旁甲状腺组织中表达呈弱阳性,阳性率为30.8%,而在甲状腺乳头状癌组织中阳性表达率为64.1%;病理参数分析结果显示在人类甲状腺乳头状癌中,伴淋巴结转移的癌组织中hTERT的蛋白表达量明显高于未伴淋巴结转移的癌组织(P<0.05),而与患者年龄、性别等因素无明显相关性;免疫组织化学法检测结果显示,p16蛋白在癌旁甲状腺组织中阳性表达率为58.97%,而在甲状腺乳头状癌组织中阳性表达率为15.38%,甲状腺乳头状癌阳性表达率明显低于对照组(P<0.05); Western blot结果显示,hTERT蛋白的相对表达量在甲状腺乳头状癌及癌旁组织中分别为0.842±0.018、0.398±0.019,而p16在人类甲状腺乳头状癌组织及癌旁组织中的蛋白相对表达量分别为0.275±0.022、0.655±0.021,差异具有显著性(P<0.05)。  结论:(1) hTERTmRNA及蛋白表达水平在甲状腺乳头状癌中呈明显上调;(2)p16 mRNA及蛋白表达水平在甲状腺乳头状癌中呈明显下调;(3) hTERT的蛋白表达水平升高与人类甲状腺乳头状癌的淋巴结转移有关;(4)由以上实验结果可推测:p16在甲状腺乳头状癌的发生发展中的抑癌作用,而hTERT与甲状腺乳头状癌细胞高增殖潜能密切相关。p16基因的失活可能参与hTERT基因的激活,二者之间是否存在作用相关性需要进一步实验研究。
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