论文部分内容阅读
目的:探讨hTERT、 p16的基因及蛋白在人类甲状腺乳头状癌(Papillary Thyroid CarcinomaPTC)中的表达及其生物学意义，为进一步研究它们之间存在的相关性奠定理论基础。 方法:收集2012年1月～2012年7月间台州市立医院肿瘤外科手术切除的标本。其中甲状腺乳头状癌标本39例，同时取癌旁甲状腺组织标本为对照组，且均经病理证实。取标本时均获得患者本人或者亲属同意，所有患者在术前并未接受过化疗或放疗。 (1) hTERT和p16 mRNA在甲状腺乳头状癌及癌旁组织中的表达检测:采用RT-PCR(reverse transcription—polymerase chain reaction, RT-PCR)法检测hTERT和p16mRNA在甲状腺乳头状癌组织及癌旁甲状腺组织中的表达情况。结果采用相对定量方法2-ΔΔCt计算。采用配对t检验分析计量资料，P＜0.05差异具有统计学意义。 (2): hTERT与p16蛋白在甲状腺乳头状癌组织及癌旁组织中的表达检测:采用组织免疫荧光方法检测hTERT蛋白表达情况，并进行相关临床资料分析;免疫组织化学方法检测p16蛋白表达情况;进行实验结果整理、统计学分析，计数资料比较采用卡方检验，P＜0.05差异具有统计学意义。Western-blot方法对比研究甲状腺乳头状癌及癌旁组织对照组中hTERT及p16蛋白表达水平，标准内参做参照，使用Image Quant Las凝胶成像分析处理，计量资料结果进行t检验，P＜0.05差异具有统计学意义。 结果:RT-PCR检测结果显示，与癌旁组织相比人类甲状腺乳头状癌组织中hTERT mRNA的相对表达量为1.5160±0.016(P＜0.05)，差异具有统计学意义;p16 mRNA在人类甲状腺乳头状癌组织中的表达明显低于癌旁组织，相对表达量为0.268±0.031(P＜0.005)，差异具有统计学意义;组织免疫荧光结果显示hTERT在癌旁甲状腺组织中表达呈弱阳性，阳性率为30.8％，而在甲状腺乳头状癌组织中阳性表达率为64.1％;病理参数分析结果显示在人类甲状腺乳头状癌中，伴淋巴结转移的癌组织中hTERT的蛋白表达量明显高于未伴淋巴结转移的癌组织（P＜0.05），而与患者年龄、性别等因素无明显相关性;免疫组织化学法检测结果显示，p16蛋白在癌旁甲状腺组织中阳性表达率为58.97％，而在甲状腺乳头状癌组织中阳性表达率为15.38％，甲状腺乳头状癌阳性表达率明显低于对照组(P＜0.05); Western blot结果显示，hTERT蛋白的相对表达量在甲状腺乳头状癌及癌旁组织中分别为0.842±0.018、0.398±0.019，而p16在人类甲状腺乳头状癌组织及癌旁组织中的蛋白相对表达量分别为0.275±0.022、0.655±0.021，差异具有显著性（P＜0.05）。 结论:(1) hTERTmRNA及蛋白表达水平在甲状腺乳头状癌中呈明显上调;(2)p16 mRNA及蛋白表达水平在甲状腺乳头状癌中呈明显下调;(3) hTERT的蛋白表达水平升高与人类甲状腺乳头状癌的淋巴结转移有关;(4)由以上实验结果可推测:p16在甲状腺乳头状癌的发生发展中的抑癌作用，而hTERT与甲状腺乳头状癌细胞高增殖潜能密切相关。p16基因的失活可能参与hTERT基因的激活，二者之间是否存在作用相关性需要进一步实验研究。