【摘 要】
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目的:克隆人胰腺癌Hedgehog信号通路中PTCH基因,构建表达载体并诱导融合蛋白表达,免疫家兔制备多抗血清,检测胰腺癌组织中PTCH的表达。方法:从人胰腺癌细胞株SW1990抽提总RNA
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目的:克隆人胰腺癌Hedgehog信号通路中PTCH基因,构建表达载体并诱导融合蛋白表达,免疫家兔制备多抗血清,检测胰腺癌组织中PTCH的表达。方法:从人胰腺癌细胞株SW1990抽提总RNA,RT-PCR扩增PTCH基因,纯化、回收后,将其插入表达载体PET22b,转化E.ColiBL21-CodonPlusTM-RP.构建重组质粒PTCH/PET22b,IPTG诱导表达,免疫印迹鉴定。融合蛋白免疫家兔制备多抗血清,免疫组化检测胰腺癌组织PTCH表达。结果:成功构建重组质粒PTCH/PET22b并诱导表达目的蛋白。PTCH多抗血清经Western免疫印迹鉴定。免疫组化检测胰腺癌标本其阳性率55%。结论:构建重组质粒PTCH/PET22b并成功表达;制备了PTCH多抗血清,为研究Hedgehog信号通路在胰腺癌中的发病机制提供了有效工具。
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