竹叶多糖提取、纯化及体外抗氧化研究

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竹子是禾本科(Poaceae)竹亚科(Bambuaoideae)多年生常绿植物,是当今世界最具有使用价值和观赏价值的植物之一。中国是竹资源大国,有“竹子王国”之称的美誉。竹类植物作为森林资源的重要组成部分。竹叶多糖是一种具有多种生理功能的植物活性多糖,但目前对竹叶提取物方面的研究报道主要集中在竹叶黄酮及其生物活性和药理方面,对竹叶多糖的研究报道远低于竹叶黄酮。长沙青皮竹是湖南长沙特色竹种种下类群变种莉竹属(Bambusa)的一种。本文作者以长沙青皮竹叶为研究对象,对竹叶多糖的提取纯化、理化性质及体外抗氧化活性进行研究。研究结果与分析:1、不同竹种中竹叶多糖含量测定及提取动力学模型建立与拟合通过苯酚-硫酸法测定了长沙青皮竹、毛竹、琴丝竹、益阳水竹、假毛竹、斑竹叶中多糖含量,分别为22.10、23.68、16.05、21.74、24.83、24.30mg/g;通过单因素试验,考察了温度、时间、液固比对竹叶多糖提取率的影响,并结合建立的多糖提取动力学模型得到各因素的拟合方程。2、多糖的分离纯化选用了Sevag法、三氯乙酸法、聚酰胺吸附法脱除长沙青皮竹叶多糖(PBL)中蛋白,结果表明:聚酰胺吸附法蛋白脱除率可达到57.77%,高于Sevag法与三氯乙酸法;多糖损失率为30.86%,介于Sevag法与三氯乙酸法之间;该法还具有去除多糖提取液中色素的功能。通过DEAE-52纤维素柱层析,以0、0.1、0.3、0.5mol/L的NaCl溶液梯度洗脱,得到四个组分的多糖:PBL-H2O, PBL-1, PBL-2, PBL-3,经浓缩,透析,冷冻干燥,得到PBL-H2O与PBL-NaCl (PBL-1, PBL-2, PBL-3合并所得)。3、多糖的理化性质多糖的溶解性试验:PBL-H2O与PBL-NaCl易溶于水,PBL溶于热水,三者均不溶于有机溶剂。高效凝胶渗透色谱法(HPGPC)测定了PBL-H2O与PBL-NaCl的相对分子量,分别为24110.6Da与22942.8Da。高效液相色谱法(HPLC)分析了PBL-H2O与PBL-NaCl的单糖组成及摩尔分数,均以阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖、木糖为主;PML-H2O与PML-NaCl的单糖组成及摩尔分数,两组分的单糖组成中葡萄糖都占有绝对比重。傅里叶红外技术对PBL,PBL-H2O与PBL-NaCl进行光谱分析,表明PBL中含有蛋白质吸收峰,三者分子内糖残基构型主要β-吡喃糖环结构。紫外扫描光谱进一步说明了PBL中含有蛋白质,样品多糖均不含核酸。4、多糖的体外抗氧化研究对比了PBL-H2O、PBL-NaCl、PBL、PML、FML与TP清除体外自由基DPPH、ABTS活性的能力,表明浓度与清除率有明显的剂量效应。两种自由基评价体系都表明TP的抗氧化能力最强,PBL-H2O的抗氧化能力最弱,其余样品的抗氧化能力介于两者之间。PBL的清除自由基能力弱于PML纯化获得的PBL-H2O, PBL-NaCl的抗氧化能力均低于PBL,可能是在纯化处理过程中对多糖抗氧化效果具有增效作用物质的减少所引起。
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