炎性疼痛是由于各种刺激因素引起肥大细胞、巨噬细胞、中性粒细胞和神经末梢等释放炎症因子,引起局部组织炎症反应。当前治疗炎性疼痛的药物常常因出现耐药性和副作用而大大影响使用效果。据以往研究表明,作为两栖动物的中华大蟾蜍,其皮肤分泌物—蟾酥中含有多种活性物质,具有抗炎、镇痛、抗癌等多种药理活性。但其中关乎该抗炎镇痛功能的具体因子鲜为人知,因此开展本研究。本研究以中华大蟾蜍为研究对象,首先对蟾蜍的皮肤腺体(耳后腺)进行透射电镜(TEM)及扫描电镜(SEM)的观察,获取其腺体内部的超微结构,并推测其分泌方式为全浆分泌;之后用腺体转录组测序和分泌蛋白蛋白组测序和功能注释的方法对蟾酥多肽的主要功能进行了预测,鉴定出炎性疼痛抑制因子—神经肽B(Bg-NPB)。为了验证该功能预测的可靠性,本研究对蟾酥中鉴定的肿瘤细胞抑制活性进行了检测,结果显示蟾酥水提物可以有效地抑制癌细胞的增殖;同时检测了蟾酥水提物对血管生成的影响,发现其以剂量依赖性地抑制人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的增殖,并且通过抑制VEGF165-VEGFR2-RAS信号通路发挥抗血管生成作用,进一步达到肿瘤抑制的作用。因此上述结果验证了包括镇痛因子—神经肽B(Bg-NPB)在内的蟾酥多肽功能预测鉴定的可靠性。进而对该因子的炎性疼痛调控活性进行研究:采用体外重组表达的方法,通过构建重组质粒(Bg-NPB-p ET-32a),利用IPTG诱导进行原核表达,筛选最佳诱导条件(0.8 m M IPTG诱导2 h),制备其活性多肽。通过构建炎性疼痛老鼠模型以及痛觉离子通道的细胞株研究Bg-NPB多肽的炎性疼痛调控活性:小鼠扭体实验以及大鼠舔足实验结果均表明Bg-NPB多肽具有抗炎性疼痛活性,并且镇痛效果呈现浓度依赖性;相关痛觉离子通道实验结果表明,Bg-NPB多肽对大多数离子通道的百分阻断率均低于10%,推测该多肽对痛觉信号的抑制可能不是通过这些离子通道途径起作用。最后对该因子的炎性疼痛调控机制进行研究,利用酵母双杂交技术构建重组质粒(Bg-NPB-p GBKT7),在小鼠外周神经中钓取Bg-NPB新的受体蛋白,并通过测定相应处理后大鼠脊髓L4-L6段中相关痛觉蛋白表达量的变化,研究信号通路中相关痛觉蛋白表达含量的变化,从以上两方面总结Bg-NPB抗炎镇痛作用的分子机制。本研究最终为开发天然药物源的新型镇痛药物做贡献。