【摘 要】
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桑蚕生物反应器主要有两种形式;转基因桑蚕(transgenicsilkworm)和杆状病毒表达载体系统(BaculovirusExpressionVectorSystem,BEVS)。 本文将由家蚕核型多角体病毒(BmNPV)IE
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桑蚕生物反应器主要有两种形式;转基因桑蚕(transgenicsilkworm)和杆状病毒表达载体系统(BaculovirusExpressionVectorSystem,BEVS)。
本文将由家蚕核型多角体病毒(BmNPV)IE-1基因启动子及其控制下的hGM-CSF基因克隆到PigA3GFP中,构建了家蚕转基因载体PigA3GFP[IE-GMCSF],利用压力渗透法和精子介导法将此载体与其辅助质粒helper-pigA3导入家蚕,获得了发绿色荧光的家蚕。提取家蚕基因组DNA用PCR法可检测hGM-CSF基因,推测hGM-CSF基因已整合进家蚕的染色体,对G3代转基因家蚕用ELISA进行hGM-CSF的活性测定,结果表明转基因家蚕冻干粉中hGM-CSF的量为95ng/100mg。
另外,本文将SARS病毒的M蛋白完整基因克隆进原核表达载体pET28a(+),在大肠杆菌BL21中诱导表达,分析表明大肠杆菌中表达的重组M蛋白的分子量为28KD,与理论值相符,此外还有一条分子量为18kDa左右的条带,推测与大肠杆菌密码子的偏爱性或表达产物的降解有关;同时将M蛋白基因克隆到杆状病毒转移载体pBacPAK-His中,用BEVS表达了M蛋白。SDS-PAGE、WesternBlotting分析表明,而用杆状病毒表达的重组M蛋白的分子量为30KDa比理论值25.96KDa高,推测与表达产物的翻译后加工如糖基化有关。
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