【摘 要】
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本文通过纤维素离子交换层析、葡聚糖凝胶层析、亲和层析技术,从孕奶牛乳汁中进行早孕因子(EPF)分离与纯化,建立奶牛早孕因子(EPF)分离纯化技术路线,从而获得高纯度的奶牛早
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本文通过纤维素离子交换层析、葡聚糖凝胶层析、亲和层析技术,从孕奶牛乳汁中进行早孕因子(EPF)分离与纯化,建立奶牛早孕因子(EPF)分离纯化技术路线,从而获得高纯度的奶牛早孕因子(EPF)。实验方法:采集怀孕4个月的孕奶牛乳汁,采用低温冷冻离心脱脂,将脱脂乳依次用硫酸铵分级盐析、DEAE-52纤维素离子交换层析、G-100葡聚糖凝胶层析、ConA-Sepharose FF 6B亲和层析技术分离纯化,得到高纯度奶牛早孕因子。用抑玫瑰花环试验对各阶段产物进行EPF活性检测,以SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测其分子量,以聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳测其等电点。实验结果:经离子交换层析后,通过抑玫瑰花环试验对各回收峰进行EPF活性检测,有EPF活性的为峰DE-Ⅰ;经葡聚糖凝胶层析后,通过抑玫瑰花环试验对各回收峰进行EPF活性检测,有EPF活性的为峰G-Ⅲ;经亲和层析纯化孕奶牛乳清400ml,得到C-Ⅰ组分1.6811mg。经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳见2条蛋白带,其相对分子质量为21.0kDa、67.0kDa,经聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳测其等电点等电点为6.80。结论:本研究表明,这条分离纯化早孕因子的技术路线是可行的,得到的相对分子量为21.0 kDa、67.0kDa的高纯度奶牛早孕因子。
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