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为研究丹酚酸B预适应的心脏细胞保护作用及机制，我们基于缺氧预适应（HPC）机制，通过心脏微血管内皮细胞（CMEC）和心肌细胞体外培养技术，建立缺O2／复O2损伤的细胞模型，以细胞活力、乳酸脱氢酶（LDH）、一氧化氮（NO）、超氧化物歧化酶（SOD）、内皮素（ET）等生化指标及超微结构变化为评价标准，观察了丹酚酸B预适应的细胞保护效应；并采用以蛋白激酶C（PKC）抑制剂chelerythrine、KATP通道阻滞剂优降糖为工具药的方式和对内源性保护物质PKC、热休克蛋白70（HSP70）的mRNA表达影响角度，探讨了丹酚酸B预适应的细胞保护机制，这是本文研究内容的核心。 另外，为对中药特定的药效寻求最佳配伍比例，进一步提高临床疗效，丰富方剂配伍理论的科学内容，推进中医药现代化进程，我们又从饮片全成分（丹参和三七药对）、有效成分（丹酚酸B和丹参酮ⅡA）两个层次，借助缺O2／复O2损伤的CMEC细胞模型，进行了方剂配比的药效物质构成变化与生物效应差异的相关性研究。 结果表明： （1）在正常培养条件下，丹酚酸B可明显提高CMEC和心肌细胞的细胞存活率和SOD活性、降低LDH活性、维持正常的形态超微结构，有降低CMEC的ET分泌和NO释放趋势。 （2）缺O2预适应可增强细胞对随后较长时间缺O2／复O2损伤的耐受性，表现为可提高细胞存活率和SOD活性，降低LDH活性，而且能明显降低CMEC因缺O2／复O2导致的ET和NO水平升高，同时明显改善其形态超微结构变化。 （3）丹酚酸B预适应具有与缺OZ预适应相似的细胞保护效应，对于 CMEC表现为早期保护和延迟保护两个时相。＠N)Ke通道阻滞剂优降糖不能消除 HPC的 CMEC保护作用，选择性 PKC抑制剂chele咖ne消除了HPC的CMEC保护效应，丹酚酸B预适应 可以使CmC被PKC抑制剂阻断的IIPC效应重现。． （5）在早期预适应中，丹酚酸 B预适应可促进缺 OZ／复 OZ损伤 C＼IEC 的HSP70 InRNA、PKC mRNA表达增强，且明显优于HPC；在晚期预运应 中，丹酚酸 B预适应同样促使 HSP70 mRNA表达增强，且与 HPC具有叠加 效应。 （6）在正常培养条件下或缺 OZ损伤条件下，丹参促使 CMEC增殖，三 七抑制增殖，各配比组中单纯丹参组促增殖作用最强（与其他组比较均P＜0．01 或0刀5），尤其在缺OZ损伤条件下，各配比组均可显著降低CMEC的NO释 放和 ET分泌，在降低 ET分泌方面以 10＊和 10：6效果最佳。 （）无论正常培养或缺 OZ损伤条件下，丹酚酸 B与丹参酮＊ A各配比 组均可显著提高CMEC活力，降低LDH释放，降低分泌ET和NO水平，以 2：8效果最佳，尤其在缺 OZ损伤条件下，单纯丹酚酸 B和单纯丹参酮＊ A作 用不如二者相互配伍明显。 结论： （）丹酚酸B预适应与缺OZ预适应具有相类似的细胞保护效应，可增＠强细胞对随后较长时间缺 O。l复 O。损伤的耐受力，从而激发了细胞的内源性 保护机制，在CMEC预适应中显示出双相保护时程即早、晚期双重保护效应。忿 ＊)K＾TI，通道阻滞剂不能消除 HI，C的 CmC保护作用，丹酚酸 B预适 应可以使被PKC抑制剂Chel…阻断的HPC效应重现。 （3）丹酚酸 B预适应的 CMEC保护作用可能的机制主要是通过增强 199HPC的级联反应的关键环节PKC的mANA表达以及HSP70InRNA表达，促进PKC活化，诱导应激蛋白HSP70合成，促进内源性抗氧化因子的增加等。 N)丹参作用的主要靶点可能在 CMEC，而丹参、三七对于 CMEC作＠用的最佳配比是10＊和10爪 丹酚酸B与丹参酮IIA抗CMEC缺OZ损伤，保护＊＊＊C的最佳配比是二8。