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奶牛乳腺炎是我国乃至全世界内影响奶牛业发展的一种重大疾病，对我国奶牛业造成严重的经济损失。为明确 DNA 甲基化是否参与脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)诱导的奶牛乳腺炎反应，本试验研究了在LPS诱导的奶牛乳腺上皮细胞炎症反应中DNA甲基化对肿瘤坏死因子（TNF-α）的作用机制。通过LPS刺激奶牛乳腺上皮细胞（BMEC）建立奶牛体外炎症模型;在炎症模型建立成功的基础上，检测 DNA 甲基化转移酶抑制剂对 TNF-α表达的影响与 DNA 甲基化转移酶（ DNMT ）表达的变化;通过甲基化特异性 PCR （methylation-specific PCR，MSP）技术与重亚硫酸盐测序(bisulfite sequencing PCR， BSP)技术检测TNF-α的甲基化程度。以下为研究结果： 1.选用浓度为0ug/ml、1ug/ml、10ug/ml和100ug/ml的LPS分别处理奶牛乳腺上皮细胞6h、12h、24h，荧光定量PCR（qRT-PCR）检测白介素-6（IL-6）、牛防御素（BNBD-5）和肿瘤坏死因子（TNF-α）的mRNA的表达量相对于对照组显著上升，同样ELISA法检测的TNF-α蛋白水平也显著上升。 2.选用浓度为 1.0umol/L、2.5umol/L 和 5.0umol/L 的 DNA 甲基化转移酶抑制剂（5-Aza-2-deoxycytidine，5-AZA）分别处理奶牛乳腺上皮细胞24h、48h、72h，qRT-PCR检测TNF-α的mRNA表达水平，5-AZA处理组的TNF-α的表达水平相对于LPS处理组显著上升。采用1ug/ml LPS处理奶牛乳腺上皮细胞3h、6h、12h，qRT-PCR检测DNMT(DNMT-1、DNMT-2、DNMT-3A和DNMT-3B)的表达量均显著降低。 3.选用1 ug/ml的LPS处理奶牛乳腺上皮细胞6h，利用MSP和BSP技术检测TNF-α启动子的甲基化程度，结果表明，LPS处理组的TNF-α启动子甲基化程度明显低于对照组。其中启动子区域的-323、-270、-245位点甲基化程度变化最为明显。 本研究结果表明，LPS可通过抑制奶牛乳腺上皮细胞TNF-α基因启动子区域甲基化水平而上调TNF-α的表达。