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活性氧物种由于参与多种疾病的发生,故近年来它们在生物和医学领域中的研究倍受关注。单线态氧(1O2)是一种非自由基型的活性氧物种,在生命过程中起着非常重要的作用。例如,它可以进攻多不饱和脂肪酸引起脂质的过氧化,导致生物膜结构和功能的改变,此外还可以损伤DNA导致细胞突变等等。一些酶体系(例如脂肪氧化酶、过氧化物酶以及嗜曙红细胞过氧化物酶)已经被确认是1O2的生化来源,脂类过氧化及分解过程中也伴随单线态氧的产生。然而,一些结论却仍然相互矛盾,这主要是因为缺少一种可靠的1O2的检测方法。本实验室曾研究了由四硫富瓦烯和蒽单元构成的化学发光探针对1O2的分析性能,结果表明该类化合物可对1O2发生高选择性的捕获反应,并产生高灵敏度的化学发光响应。本论文利用该类单线态氧化学发光探针,结合电子顺磁共振(ESR)等方法,开展了人唾液和脂质过氧化物体系中单线态氧的产生和定量测定研究。所取得的主要研究结果如下:
1.利用化学发光探针4,4’(5’)-双[2-(9-蒽氧基)乙硫基]四硫富瓦烯(BAET),研究了由过氧化氢启动的人唾液体系中单线态氧的产生及其定量检测,并与另一种常用的化学发光探针(2-甲基-6-苯基3,7-二氢咪唑并[1,2-a]吡嗪-3-酮)测定的结果进行了对比研究。结果表明,BAET对1O2具有更高的反应选择性,可以实现在多种活性氧物种共存时1O2的选择性测定。
2.利用化学发光探针4,5-二甲硫基-4’-[2-(9-蒽氧基)乙硫基]四硫富瓦烯(DAET)和ESR等检测技术,研究了亚麻酸过氧化物被细胞色素C和乳过氧化物酶分解时所伴随的可能的单线态氧的产生及反应过程。实验结果证实了该分解过程中有1O2的产生,并对其进行了定量测定。另外,通过ESR,液质联用,以及紫外可见光谱等方法对反应产物进行了研究,并揭示了上述两种血红素蛋白分解长链脂过氧化物产生1O2的机理。