绿豆芽离心损伤生理及抗病性研究

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本文通过实验室模拟碰伤,以绿豆芽为材料,研究离心伤害对细胞的生理及抗病性的影响。首先,对离心处理的绿豆芽进行台盼蓝、中性红、番红、固绿和苯胺兰染色,观察离心伤害对细胞膜、液泡、细胞壁及细胞核的影响,试图寻找引起伤残细胞的离心力,并判断细胞坏死是否由细胞膜渗漏引起。其次,测定离心伤害的绿豆芽的生长势和腐烂率及与膜脂过氧化、活性氧、保护酶、酶促褐变有关的生理指标的动态变化,以研究离心伤害对绿豆芽生理生化的影响。最后,对离心伤害的绿豆芽接种青霉菌,检测生长势和腐烂率,以评价其系统抗病能力;测定水杨酸(SA)、木质素的含量变化及苯丙氨酸解氨酶(PAL)的活性,以评价其基础抗病能力;分离纯化自身的致病菌结合牛津杯抑菌实验,以评价其组织产生新细胞的能力和特异性抗病能力;通过茉莉酸甲酯、壳聚糖、水杨酸、Vc及卵磷脂处理离心伤害(RCF=376×g及RCF=845×g)的绿豆芽并接种青霉菌,试图提高对绿豆芽的保护能力。主要研究结果如下:(1)染色结果表明:绿豆芽纰织细胞结构基本正常,只是渗漏,细胞在3381×g时可能破裂,且在RCF=94×g-376×g之间出现伤残细胞。(2)生理指标测定结果表明:94×g下的细胞基本保持了膜的完整性,376×g以上的细胞膜受到伤害逐渐加重,细胞的通透性增大及渗漏加快。随机械伤害时间的延长,受伤绿豆芽中的超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性呈先升高后降低的趋势,过氧化物酶(POD)活性呈逐渐降低趋势,94×g下的SOD、POD、CAT活性最高,从而有效地清除活性氧,随着伤害程度的增加而降低。伤害处理0.5h时,出现“活性氧迸发”,随着时间的延长及伤害程度的增加,0-2降低速率增大。总酚含量随着伤害程度的增加及时间的延长逐渐增大,与绿豆芽培养过程中的褐变程度正相关;伤害处理初,PPO活性随着伤害程度的增大及时间的延长而降低,可能是细胞破损受到蛋白酶作用。(3)抗病实验结果表明:94×g下的绿豆芽的生长势与对照接近;随着伤害程度的增加,其褐变程度及腐烂率增大。SA和木质素的含量及PAL活性随时间呈上长升、下降的趋势,说明伤害初,其抗性增强;随着时间的延长及伤害程度的增加,抗性减弱。牛津杯抑菌实验说明抗菌成分可能是一些大分子物质,如特殊蛋白质。卵磷脂、水杨酸、Vc能够维持受伤绿豆芽健康的生长状态,减少腐烂,但要清楚认识其机理,还需进一步实验探讨、验证。
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