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目的:大黄(庶虫)虫丸具有活血化瘀、缓中补虚的功效,用于治疗形体赢瘦、腹满不食、肌肤甲错、两目黯黑的五劳虚极,内有干血之证。在临床上广泛用于治疗肝病、恶性肿瘤、慢性肾病、干燥综合征、关节病、皮肤病、乳腺增生病、子宫内膜异位症等与免疫失调相关的多种疾病,该方在抗凝、溶栓,改善血液流变学,保肝、护肝、抗肝纤维化,减轻肾组织病变,抑制肾组织纤维增生等方面的药理作用已得到深入研究,本课题旨在采用现代免疫学技术,结合分子生物学知识,系统地探讨大黄(庶虫)虫丸的免疫调节及其作用机理。为临床合理用药提供理论依据,并通过本方研究为活血化瘀法作用实质提供新的研究思路和方法。 方法:通过观察大黄(庶虫)虫丸对免疫功能正常及异常小鼠的免疫器官和免疫分子的影响,揭示大黄(庶虫)虫丸的免疫作用机制。具体分为:①大黄(庶虫)虫丸对正常和免疫抑制小鼠胸腺、脾脏结构及重量指数的影响:运用光镜和电镜观察免疫器官组织结构的变化,并检测免疫器官重量指数的变化。②大黄(庶虫)虫丸对正常和免疫抑制小鼠外周血及脾细胞悬液中T淋巴细胞亚群CD4~+CD25~+T细胞的影响。运用流式细胞术检测CD4~+CD25~+T细胞的百分率。⑨大黄(庶虫)虫丸对小鼠外周血、脾细胞IL-4、IFN-γ浓度的影响:运用环磷酰胺和OVA腹腔注射分别造成免疫抑制和免疫超常小鼠,采用ELISA法分别检测免疫正常、免疫抑制小鼠外周血和免疫超常小鼠脾脏分离的T淋巴细胞培养液中IL-4、IFN-γ的蛋白含量。④运用原位杂交方法检测小鼠不同免疫状态下的脾脏、胸腺组织及脾淋巴细胞的IL-4mRNA、IFN-γmRNA表达情况。 结果: ①大黄(庶虫)虫丸对正常和免疫抑制小鼠胸腺、脾脏结构及重量指数的影响:正常组的脾脏与胸腺组织结构清晰、正常,免疫抑制组的脾脏与胸腺结构明显差异,结构分界不清,免疫细胞减少,淋巴细胞溶解,染色质变浅。服用大黄(庶虫)虫丸后,各组免疫器官形态结构不同程度得到改善,说明该方能够影响免疫器官。而对正常小鼠脾脏、胸腺重量指数无显著影响(P>0.05);可提高免疫抑制小鼠脾重量指数,中药大剂量可以提高胸腺重量指数。 ②大黄(庶虫)虫丸对正常和免疫抑制小鼠外周血及脾细胞悬液中T淋巴细胞亚群CD4~+CD25~+T细胞的影响:结果表明,大黄(庶虫)虫丸对正常免疫小鼠调节性T细胞亚群没有明显提高或降低作用,可显著降低免疫抑制小鼠调节性T细胞亚群CD4~+CD25~+T细胞百分率(P<0.01或P<0.05)。 ③大黄(庶虫)虫丸对小鼠外周血、脾淋巴细胞IL-4、IFN-γ浓度的影响:ELISA结果表明:对正常小鼠外周血的IFN-γ、IL-4含量没有明显影响(P>0.05);免疫抑制组小鼠外周血中IFN-γ、IL-4含量降低,与正常对照组比较,有显著性差异。通过不同剂量的大黄(庶虫)虫丸治疗后,IFN-γ浓度得到提高,与模型组比较有显著性差异(P<0.05或P<0.01),而IL-4与抑制模型组比较,没有显著性差异(P>0.05)。对免疫超常小鼠的检测表明,大黄(庶虫)虫丸能够提高免疫小鼠脾细胞中IFN-γ的蛋白含量,降低IL-4的蛋白含量。 @大黄庚虫丸对小鼠脾脏、胸腺组织及脾细胞IL一mRNA、IFN1mKNA表达的影响:结果显示,大黄赝虫丸对正常小鼠脾脏、胸腺组织中IFN十、IL叶YRNA的表达没有明显影响。对免疫抑制小鼠脾脏、胸腺组织中IFN1YKNA的表达增强,与免疫模型比较有显著性差异(P<0刀5),但对1**m NNA的表达没有明显影响。大黄庚虫丸对免疫超常模型作用结果显示,该方可抑制*AmKNA的表达,降低IL*的合成,同时可增强Hp4YInRNA的表达。 结论:从形态结构、免疫细胞、免疫分子等不同层次对大黄赝虫丸的免疫调节作用进行了实验研究,结果显示,大黄庚虫丸对正常小鼠免疫器官形态学无明显影响,但可改善免疫抑制小鼠免疫器官的形态结构,使之接近正常。对正常小鼠胸腺及脾脏重量指数无明显影响。可提高免疫抑制模型小鼠免疫功能的作用,能够减少免疫抑制小鼠脾细胞及外周血中CD4“CD25”细胞比例,提高外周血中IFN-Y的含量,增强细胞免疫,对L*的含量没有明显影响;对免疫超常型小鼠的免疫状态具有抑制作用,该抑制作用主要是通过增强 IFN1mANA、抑制 ILAlRNA的合成,调整 TH/TllZ比值,使 TH细胞占优势实现的。结果表明大黄赝虫丸的免疫调节作用,是通过双向调节和多环节、多途径实现的。