极小种群野生植物大树杜鹃的形态解剖特征及内生真菌多样性研究

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大树杜鹃(Rhododendron protistum var. giganteum)是杜鹃花科(Ericaceae)、常绿杜鹃亚属(Rhododendron subg. Hymenanthes)、常绿杜鹃组大叶杜鹃亚组(Rhododendron subsect. Grandia Sleumer)的高大乔木。目前,仅分布于云南腾冲县大塘高黎贡山西麓的原始森林中,由于该植物分布地的特殊性(原始森林)和资源的稀少性,其被国家林业局列入《全国极小种群野生植物拯救保护工程规划(2011-2015年)》的极小种群目录,保护迫在眉睫。但迄今为止,关于大树杜鹃的解剖结构和内生真菌共生等方面的研究几乎空白,鉴于此,本研究通过石蜡切片观察大树杜鹃的根、茎、叶结构及与近缘种叶表皮显微特征,并采用根段直接培养法分离其根部内生真菌,采用ITS测序分析不同居群可培养内生真菌其多样性及差异性,旨在进一步探明该物种的基础生物学特性,并为其种群保护、人工繁殖以及种群恢复提供科学依据。主要研究结果如下:1采用常规石蜡切片对大树杜鹃的叶片、幼茎和根的解剖结构研究表明,大树杜鹃根的次生结构由周皮、韧皮部、木质部组成;大树杜鹃幼茎的结构由表皮、皮层、韧皮部、木质部和髓组成;其叶片的解剖结构显示,大树杜鹃的叶为典型的异面叶,由上下表皮、栅栏组织、海绵组织组成。上表皮角质层发达、其下有加厚的1-2层下皮层细胞;气孔器只分布于下表皮,且下表皮上密被棕色毛被,栅栏组织与海绵组织之比大约为1,表明大树杜鹃是耐寒耐旱的植物。采用扫描电镜对大树杜鹃的叶片毛被结构及种子表面结构进行观察,结果表明,大树杜鹃叶片有两层不同类型的毛组成,即上面一层呈海绵状绒毛,下面一层为短的薄片状绒毛;其种子微小、有明显的背腹面之分,种脐端较平,合点端较圆,且种子两端和两侧均具翅。2采用马丁-孟加拉红培养基对大树杜鹃2个居群的可培养内生真菌进行分离与纯培养,并根据菌落与菌丝形态特征与解剖结构鉴定不同居群的内生真菌种类,结果表明:从大树杜鹃两个居群400个根段中分离出287个生长缓慢的菌株,大河头居群(DHT)153株,根据菌落形态特征和解剖特征归为14类,其中初步鉴定到种的只有1种类型,鉴定到属的有2种类型;茨竹河居群(CZH)134株,根据菌丝等形态特征和解剖特征归为11类,该居群的菌落以棕色和白色为主,其中棕色的类型CZH-4初步鉴定为Cryptosporiopsis ericae,此菌也为两个居群的共有菌,其它类型菌株暂无法鉴定。3基于纯培养的287株内生真菌,采用ITS测序的方法进行大树杜鹃可培养内生真菌多样性分析表明,大树杜鹃两个居群分离到的287株内生真菌经菌株DNA-ITS序列的分子技术,最终鉴定为17个种类,其中11个形态类型鉴定到种水平,4个形态类型鉴定到属水平,2个到目水平。两个居群的菌株相似度很低,只有C. ericae、Ilyonectria radicicola和I. cyclaminicola这三种真菌为两个居群的共有种,而C. ericae则是两个居群的共有优势种,分别占DHT和CZH居群分离总菌株数的35.95%、29.85%。两个居群中,DHT居群共有种的分离率、多样性指数、丰富度指数均高于CZH居群,而均匀度指数则相反,说明不同生境大树杜鹃内生真菌群的多样性不同,且有各自的多样性特征。4基于对大树杜鹃解剖特征和内生真菌分离、鉴定方面的研究,结果表明:(1)其解剖结构与特殊生境表现出一致的适应性,这提示在加强种群保护的同时,更要关注其生境的保护;(2)从大树杜鹃根内分离出较为丰富的内生真菌,说明其生长与真菌有着密切的关系,接种优势菌株将为人工引种栽培过程中,突破幼苗生长缓慢、易死的瓶颈提供一种新的研究思路和方法。
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