HIV/AIDS肺脾气虚证患者细胞自噬状态及薯蓣丸加减方对其影响

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目的:探讨HIV/AIDS肺脾气虚证自噬相关mRNA表达状态及薯蓣丸加减方对自噬相关mRNA的影响,为仲景经方治疗感染性疾病和疑难杂病提供新的证据和思路。方法:1研究对象:选取河南某地区HIV/AIDS肺脾气虚证患者20例,HIV/AIDS无证可辨患者20例,健康人20例(分别标注为FP组、WZ组和JK组)。采用2018年卫生部颁发的《艾滋病诊疗指南》作为西医诊断标准。中医证候诊断依据前期研究成果“HIV/AIDS肺脾气虚证诊断量表”,FP组进行薯蓣丸加减方干预,时间为6个月。2症状体征:根据“HIV/AIDS肺脾气虚证诊断量表”进行症状体征积分评估。3免疫指标检测:用FASCali bur流式细胞检测仪检测CD4+T、CD8+T及CD4+T/CD8+T淋巴细胞计数。4病毒载量检测:用Ampilcor COBAS病毒载量检测仪检测病毒载量。5自噬相关mRNA检测:提取受试者空腹外周血PBMC细胞,提取总RNA,采用Qiagen基因表达谱芯片检测自噬相关mRNA的表达,用Qiagen公司网站的在线分析软件RT~2Profiler PCR Date Analysis对基因芯片数据进行t检验,按照P值(P<0.05)和倍数差异Fold Chang(一般简写为FC,FC≥1.5或FC≤0.67)筛选差异基因。并在DAVID(https://david-d.ncifcrf.gov/)、STRING(http://string.embl.de)、KEGG-PATHWAY上进行差异mRNA本体功能、mRNA相互关系和信号通路分析。6透射电镜观察:分别进行自噬抑制剂、诱导剂、含薯蓣丸加减方血清等方法处理PBMC细胞。用透射电子显微镜动态观察各组PBMC细胞中药干预前后的自噬状态。结果:1一般资料:FP、WZ及JK三组在性别和年龄上差异无统计学意(P>0.05)。2症状体征:HIV/AIDS肺脾气虚证患者疗前症状积分为30.12±7.84、疗后症状积分为7.33±5.60,二者差异有统计学意义(P<0.05),薯蓣丸加减方能有效减轻患者症状体征;HIV/AIDS肺脾气虚证治疗后动则气喘、易感冒、自汗、泄泻、恶风寒、胸闷、乏力、神疲、心慌心悸、舌胖大、舌苔白、脉虚或弱等方面症状体征出现频次减少且单项症状体征积分明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。3免疫指标:治疗前FP组、WZ组与JK组相比,CD4+T、TH/TS差异有统计学意义(P<0.05);FP组治疗后CD4+T、CD8+T、TH/TS无统计学意义(P>0.05),但CD4+T、TH/TS表达有所升高。4基因芯片检测:FP组与JK组相比DDIT4、CXCR4、IRS2表达下调,PDPK1表达上调;FP组与WZ组相比CXCR4、ATG16L1表达下调,IRS2、BCL2、TSC1表达上调。5薯蓣丸加减方治疗后:DDIT4、CXCR4、ATG16L1表达升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。6差异基因本体功能:差异mRNA与细胞增殖和对病毒的防御反应等有关,涉及autophagy通路,且构成分子关系图各个差异表达的mRNA之间具有互相调控的关系。7电镜观察:用药前后FP组PBMC细胞自噬有所改变。结论:1自噬相关基因DDIT4、CXCR4、IRS2、PDPK1、ATG16L1和TSC1差异表达,并且与autophagy通路有关,这可能使HIV/AIDS肺脾气虚证患者细胞自噬处于抑制状态。2薯蓣丸加减方干预后,HIV/AIDS肺脾气虚证组的自噬相关基因DDIT4、CXCR4、ATG16L1表达升高,可能增强自噬。
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