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研究目的1.复苏,传代培养羊水干细胞2.对其生物学特性及向成骨细胞定向分化经行研究3.沿尾静脉注射AFS,对其治疗大鼠骨质疏松(OP)效果进行评价材料和方法1.选取不同代数的AFS,复苏,传代培养。2.观察细胞的形态学特性,描述体外培养的AFS的生物学特性3.应用诱导因子诱导AFS定向分化为成骨细胞,并通过一系列方法(细胞形态,细胞碱性磷酸酶染色,Ⅰ型胶原蛋白测定等)对分化后的细胞进行鉴定4. AFS对大鼠OP治疗效果的评价:采用同龄SD大鼠,随机分为4组,A组正常组,B组模型组, C组制造模型并且一次性注入AFS, D组制造模型并且不同时间两次注入AFS。除A组灌胃用等量生理盐水,其余各组连续14天灌胃RA,同时,C组于灌胃第14天尾静脉注射AFS,D组于灌胃第7天及第14天尾静脉注射AFS。实验过程观察生活习性及体重变化,骨密度测定,血清骨代谢指标检测定,测量股骨横断面外径(B)及湿重,骨微观结构的观察。结果1.成功复苏AFS,诱导分化细胞具有成骨细胞特性2. AFS对大鼠骨质疏松治疗效果的评价2.1股骨骨密度(BMD)测定结果显示:D组实验前后差异无统计学差异(P>0.05),说明AFS对骨质疏松具有潜在缓解效果2.2血清生化指标检测结果显示:D组血钙,血磷,TRACP实验前后均无统计学差异(P>0.05),ALP实验后较前明显增加,说明AFS对骨质疏松钙盐沉积具有潜在治疗效果2.3D组大鼠股骨湿重实验前后无统计学差异,说明AFS对骨质疏松的修复作用表现在股骨重量上2.4骨薄片Goldner三色法染色显示:D组可见部分胶原恢复到与A组骨胶原相似的结构结论1.成功复苏并传代不同代数的AFS,证明其具有定向诱导分化的能力2. RA具有致骨质疏松作用,成功制造出OP模型3. AFS可以抑制血钙浓度升高,增加钙盐沉积,减少TRACP的生成,减少骨吸收,从而增加骨量。4. AFS对OP具有潜在修复作用。