【摘 要】
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目的:研究表明中医药对出血性中风具有积极作用。任继学教授提出应用“破血逐瘀法”治疗出血性中风,临床疗效显著。抵当汤作为治疗急性脑出血中风经典方剂,其作用机制尚不明确。本研究旨在通过定量蛋白质组学及靶向蛋白质组学的方法,探究抵当汤（Di Dang Decoction,DDD）对急性脑出血中风大鼠的脑保护作用机制。方法:首先将抵当汤通过HPLC-HRMS分析方法明确其主要起效成分。后共135只健康Sp
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目的:研究表明中医药对出血性中风具有积极作用。任继学教授提出应用“破血逐瘀法”治疗出血性中风,临床疗效显著。抵当汤作为治疗急性脑出血中风经典方剂,其作用机制尚不明确。本研究旨在通过定量蛋白质组学及靶向蛋白质组学的方法,探究抵当汤（Di Dang Decoction,DDD）对急性脑出血中风大鼠的脑保护作用机制。方法:首先将抵当汤通过HPLC-HRMS分析方法明确其主要起效成分。后共135只健康Sprague-Dawley（SD）大鼠随机分为五组:空白组（Control,n=27）、模型组（Model,n=27）、抵当汤低剂量组（DDD Low-dose,n=27）、抵当汤中剂量组（DDD medium,n=27）和抵当汤高剂量组（DDD High-dose,n=27）,分别灌胃1天、3天及7天。其中空白组与模型组采用等剂量生理盐水灌胃,抵当汤低、中、高剂量分别按浓度:0.15625g/ml、0.3125g/ml、0.625g/ml进行灌胃。采用自体血注入尾状核方式诱导大鼠急性出血性中风模型。采用改良神经功能缺损评分法（m NSS Score）评价脑神经功能缺损,苏木精-伊红染色（HE）观察病变部位脑组织病理变化,白蛋白浓度测定以评估血脑屏障损伤程度,脑区含水量测定以评估脑组织受损情况。将上调差异蛋白阈值设定为＞1.2和下调差异蛋白阈值设置为＜1/1.2。采用主成分分析及皮尔森相关系数进行生物重复性检验。提取大鼠大脑皮层进行定量蛋白质组学检测。使用靶向蛋白质组学量化鉴定目标靶蛋白。结果:1.抵当汤起效的主要成分有:没食子酸、苦杏仁苷、番泻苷B、大黄苷-8-葡萄糖苷、番泻苷A、大黄素、大黄酚、芦荟大黄素、大黄酸。2.改良神经功能缺损评分（m NSS score）结果显示,与模型组（10.89±1.45）相比,应用抵当汤高剂量组7天（6.22±1.20）,神经功能缺损改善最为显著,结果具有统计学意义（p＜0.05）。3.苏木精-伊红染色结果（Hematoxylin and Eosin,HE）显示:模型组出现明显的脑出血组织病理学变化。应用抵当汤低、中、高剂量组在第3天和第7天组织病理学变化改善较明显,在高剂量组7天最为显著。4.应用抵当汤高剂量组7天明显降低出血性中风所致白蛋白浓度升高,表明抵当汤能降低脑出血所致血脑屏障破坏,且抵当汤高剂量组本身对血脑屏障的完整性无影响,结果具有统计学意义（p＜0.05）。5.脑区含水量结果表明:模型组大鼠脑区含水量较空白组明显升高,且应用抵当汤低、中、高剂量组1天、3天、7天后,能够降低出血性中风所致的脑区含水量增高,且高剂量组7天改善最为明显,表明抵当汤高剂量组对出血性中风所致脑水肿具有很好改善,结果具有统计学意义（p＜0.05）。6.根据主成分分析和皮尔森相关系数结果表明,蛋白定量符合生物学重复性检验,结果具有统计学意义(p＜0.05。7.定量蛋白质组学结果显示,与空白组相比,模型组S100a8和S100a9上调3.316倍（p=0.014244）和4.957倍（p=0.000063）,应用抵当汤高剂量组7天,分别下调0.614倍（p=0.033702）和0.506倍（p=0.000024）。与空白组相比,模型组Col1a1和Col1a2下调0.677倍（p=0.000025）和0.598倍（p=0.005657）,应用抵当汤高剂量7天后,分别上调1.319倍（p=0.000184）和1.348倍（p=0.014097）,结果具有统计学意义（p＜0.05）。8.通过靶向蛋白质组学结果表明:S100a8（p=0.033702）,S100a9（p=0.000024）及Col1a1（p=0.000184）,Col1a2（p=0.014097）这些结果与定量蛋白质组学结果趋势一致,结果具有统计学意义（p＜0.05）。结论:应用抵当汤高剂量组7天,可明显改善急性出血性中风大鼠神经功能缺损情况及脑组织病理学变化,对于维持血脑屏障的完整性,降低出血性中风大鼠脑组织水肿均效果显著。可能通过下调S100a8 S100a9及上调Col1a1 Col1a2对急性出血性中风大鼠起到脑保护作用机制。
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