海带褐藻糖胶的提取、分离纯化及其生物活性的研究

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海带褐藻糖胶(Fucoidan)是一种独特的结合有硫酸基团的水溶性多糖,具有很高的药用价值。本文从海带中提取褐藻糖胶,分离纯化得到均一的多糖组分LF2,并对其单糖组成、红外光谱结构及体内外抗氧化和抗肿瘤活性进行研究。论文研究旨在为海带褐藻糖胶的功能性研究及其开发利用提供一定的理论基础,研究内容及结果如下:1、比较三种不同方法对海带褐藻糖胶提取的影响,其中复合酶法得率为4.96%,较水提法和酸提法分别提高了 78.42%(P<0.01)和44.61%(P<0.01);粗多糖经DEAE-52纤维素柱层析并收集以0.5mol/LNaCl溶液洗脱的组分,浓缩、冷冻干燥后得到海带褐藻糖胶LF2,得率为58.7%;用SephadexG-200柱分离纯化,得到纯度较高的均一性多糖LF2。2、HPLC分析表明LF2含甘露糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、木糖、岩藻糖且摩尔比为1.253:0.341:0.298:0.275:0.932:0.316:1.106;红外光谱分析表明多糖LF2具有糖类结构特征,且含有吡喃糖、硫酸基团。3、体外抗氧化实验结果显示,LF2对羟基自由基的清除效果最好,清除率为64.88%,同浓度下LF2对DPPH自由基的清除率为31.97%,且二者在0~3mg/mL多糖浓度范围内都呈现剂量关系。还原力测定结果显示,LF2的还原能力相对较弱。4、多糖LF2组小鼠的血清和肝脏SOD活力、CAT活力及MDA含量较衰老模型组均有显著性差异,其中高剂量组SOD活力分别提高了 33.70%和65.78(P<0.01),CAT活力分别提高了 69.75%和48.34%(P<0.01),MDA含量分别降低了41.73%和28.03%(P<0.01)。三者均呈量效关系,说明LF2具有体内抗氧化活性,可增强机体抗氧化系统功能。5、LF2对HepG-2细胞、H22细胞抑制率最高分别为40.05%和31.26%,且在0-0.8mg/mL内均呈一定量效关系。作用36h较24h抑瘤率有极显著差异,但48h较36h无显著性差异;LF2作用HepG-2细胞48h后经AO/EB染色可观察到其形态结构发生了一系列凋亡特征,表明LF2对人肝癌HepG-2细胞的抑制作用可能是通过诱导促进细胞凋亡的途径来实现。6、多糖LF2各剂量组较生理盐水组小鼠脾脏和胸腺指数均显著提高并呈一定的剂量关系,其中LF2高剂量分别提高了 48.52%和52.88%(P<0.01);LF2组荷瘤小鼠血清中TNF-α和IL-2含量均显著提高,高剂量组较生理盐水组分别提高了 49.18%和50.06%(P<0.01);LF2中、高剂量组均可显著延长腹水瘤小鼠的生存时间,生命延长率最高可达44.2%。表明LF2抑制肿瘤增殖的作用与其增强免疫力的功能有一定联系。
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