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宫颈癌是世界上女性患者中常见的癌症之一,发病率和死亡率很高。该病是由高危型人乳头瘤病毒（Human papillomavirus,HPV）引起的。目前,在已发现的200多种HPV亚型中,HPV45属于高危型之一,与宫颈癌的发生密切相关。L1蛋白是组成HPV病毒衣壳的主要结构蛋白,可诱导机体产生中和性抗体。因此,抗HPV45 L1蛋白单克隆抗体（Monoclonal antibody,m Ab）的制备以及L1蛋白抗原表位的鉴定,对该病的预防与检测具有重要意义。本研究对SUMO-HPV45 L1蛋白进行诱导表达条件的优化,使用Ni-NTA亲和层析方法纯化L1蛋白,结果表明IPTG（Isopropylβ-D-thiogalactoside）终浓度为0.1 mmol/L,在16℃条件下诱导表达18 h时,目的蛋白可溶性表达效果最好,SDS-PAGE结果显示目的蛋白纯度可达90%以上,Western-blot结果表明目的蛋白可与抗His单抗发生特异性反应。将纯化的蛋白免疫两只小鼠,小鼠血清效价可达1:1.024×105以上。利用杂交瘤技术制备单克隆抗体,筛选出4株抗HPV45 L1蛋白的杂交瘤细胞株,分别命名为2F5,3B7,3C11,3G11。选取效价最高的细胞株3C11,用体内诱生法大量制备腹水,并采用辛酸-硫酸铵法进行纯化。间接ELISA结果表明纯化后3C11抗体效价达1:2.56×105以上,亲和常数为1.4×109 L/mol,且该抗体与HPV18/31/53/58亚型均无交叉反应。以纯化后的3C11单克隆抗体为靶分子,使用噬菌体十二肽库进行淘选。挑取出12个可与单抗3C11呈现强阳性反应的克隆进行测序,利用DNASTAR软件分析,通过Dot-ELISA及间接竞争ELISA进行鉴定,结果表明“381VPNTYD386”为L1蛋白的线性表位。本研究成功制备了抗HPV45 L1蛋白的单克隆抗体,并筛选出了L1蛋白的线性表位“381VPNTYD386”,为HPV45 L1蛋白的免疫检测提供了便捷的技术手段,为进一步分析L1蛋白结构与功能关系打下了基础,对深入了解抗原-抗体之间的相互作用具有重要意义。