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ApoE由299个氨基酸组成,具有多种生物学功能.人类apoE的合成是由三个等位基因ε2、ε3和ε4所控制,分别编码血浆中三种亚型E2、E3和E4.虽然apoE的三种亚型之间仅为一个氨基酸的改变,即E2(Cys112,Cys158)、E3(Cys112,Arg158)、E4(Arg112,Arg158),但是它们在结构乃至生理功能、病理效应上却有着重大的差异.遗传研究表明apoE4基因型是冠心病及散发型、迟发型阿尔茨海默病(Alzheimers disease,AD)的危险因素,同时apoE2基因型与遗传性Ⅲ型高脂血症有关.为了从分子水平研究apoE各亚型的结构差异及其与功能之间的构效关系,近而探索相关疾病的发病机制,我们需要获得各亚型apoE蛋白.该实验采用RT-PCR方法从肝组织中扩增出apoE3基因的cDNA,将其克隆至克隆载体pGEM-3Z上,阳性克隆的重组质粒DNA经酶切及PCR扩增鉴定测序,结果与报道一致;采用定点突变技术得到apoE2和apoE4基因的cDNA,也将其克隆至克隆载体pGEM-3Z上,经鉴定结果与报道一致.接着将上述三种cDNA亚克隆到原核表达载体pT7-PL中,转化宿主菌BL21(DE3)plysS,在37℃的LB培养基中经IPTG诱导,在相对分子量34000处得到了一条表达条带,进一步用Ni<2+>的亲和层析获得3种纯化的apoE融合蛋白.apoE2、apoE3、apoE4基因的克隆及表达证明了利用原核表达系统表达人apoE的可行性,对于今后进一步研究apoE各亚型的分子结构、生物学功能,探索不同apoE各亚型与疾病的关系具有重要的意义.