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IH1是本课题组在小鼠胸腺中发现的新分子,它随胸腺增龄表达降低,生物信息学和初步实验研究显示,它在雄激素受体、NF-kB等信号通路当中可以发挥一定作用。NF-κB介导的信号转导是最重要的细胞信号转导通路之一,它在细胞增殖和凋亡、免疫应答、肿瘤发生、心血管疾病和神经系统发育中均起着重要作用。而在某些疾病如癌症、风湿性疾病、慢性炎症、哮喘、神经退行性疾病和心脏病中,NF-κB信号通路处于持续活化的状态。我们的研究旨在探索IH1与NF-κB细胞信号转导的关系及其可能机制,具体工作如下:
以EIA细胞为模型,对IH1基因进行过表达和RNA干扰,用IL-1β刺激细胞,在不同时间点观察NF-κB活化以及信号分子Ir-Ba蛋白水平及磷酸化水平的变化。结果显示,无论对IH1进行过表达或干扰,都可以增强NF-κB的活化,增加IκBa分子的磷酸化。
为阐明其机制,我们首先对IH1蛋白的结构进行了分析和预测,该分子N端含一个RWD结构域,C端则可能大部分处于未折叠状态,而很多这种未折叠蛋白在信号转导或蛋白质相互作用中发挥了重要作用,这提示其功能可能在于与其它分子相互作用。已知RWD结构域与泛素类结合酶E2在结构上同源,并且一个含该结构域的分子可以与Ubc9结合,RWD结构域发挥了不可替代的作用;另外,人类IH1同源基因编码的蛋白可以和Drg1或Drg2分子相互作用。因此,我们构建了Ubc9、Ube12、Ubc13、Drg1和Drg2几个分子的真核表达载体,用激光扫描共聚焦显微镜对细胞内IH1与上述几个分子的共定位进行研究。结果发现,IH1分子主要分布于胞浆中,能与几个分子共同定位;随后用免疫共沉淀技术研究了它们之间的相互作用,发现IH1可以与Drg1和Drg2发生相互作用,而未能观察到IH1与其它分子的相互作用。
综上所述,我们认为IH1分子参与了NF-κB细胞信号转导,但其机制仍需进一步研究。另一方面,它还可能通过与Drg1或Drg2分子相互作用,在细胞生长和个体发育的过程中起到一定作用,由此可见,IH1的表达下降可能影响到胸腺细胞的分化发育,从而促进胸腺的增龄性萎缩。