微生物法生产二羟基丙酮

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本论文以生物柴油联生产物甘油为原料,开展微生物发酵法生产高附加值的精细化学品二羟基丙酮的研究。论文作了以下几方面的工作:利用二羟基丙酮与甘油的化学性质,建立了甘油转化生产二羟基丙酮的微生物快速筛选模型;并利用这个微生物快速模型,从几十份采自全国各地的土壤中筛选产二羟基丙酮的微生物菌株;对其中两株编号为H004、H005的酵母进行了微生物学鉴定,采用形态观察、分子生物学鉴定方法等手段,H004被鉴定为膜醭毕赤酵母(Pichiamembranifaciens),H005为葡萄牙棒孢酵母(Clavispora lusitaniae),这两株菌株均已保藏在中国典型培养物保藏中心(CCTCC)。论文对膜醭毕赤酵母产二羟基丙酮的生产工艺进行了研究:考察了发酵温度、装液量、起始pH、甘油浓度等对二羟基丙酮发酵的影响,在单因素实验的基础上,选取pH、温度、发酵时间为实验因素,采用响应面分析方法对二羟基丙酮的生产工艺进行优化,得到的优化生产工艺如下:在摇瓶发酵试验中,采用的培养基为:甘油40g/L,酵母提取粉5 g/L,蛋白胨2 g/L,摇床转速200 rpm,初始pH为6.74,发酵温度为29.6℃,发酵时问为48.8 h,二羟基丙酮最大浓度为12.88g/L。在此优化的生产条件下,在15L发酵罐中生产二羟基丙酮,产物浓度达到13.57 g/L。采用硅胶吸附层析法从发酵液中分离二羟基丙酮,试验首先进行了层析洗脱剂的选择,然后研究了硅胶柱高径比、柱加样量、洗脱流速对层析分离二羟基丙酮和甘油分辨率的影响,得到较佳的层析工艺条件,层析洗脱剂采用95:5的乙酸乙酯-乙醇混合溶剂,柱高径比35,柱加样量为柱床体积5%,洗脱流速0.55BV/h,在该工艺条件下二者分辨率RS达到0.922。洗脱液经过浓缩,结晶工序,得到高纯度的二羟基丙酮成品。
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