迷迭香抗氧化活性及其作用机理研究和天然抗氧化保健品的研制

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利用超临界CO2流体萃取技术萃取迷迭香天然抗氧化剂,采用二级分离方法,研究了萃取压力、萃取温度、一级分离压力、一级分离温度、有无夹带剂及夹带剂的用量等因素对超临界萃取工艺的影响,以得率为指标,通过正交实验设计,得到了最佳工艺参数:一级分离,萃取压力30MPa、萃取温度55℃、一级分离压力5MPa、一级分离温度70℃;二级分离,萃取压力30MPa、萃取温度65℃、一级分离压力15MPa、一级分离温度60℃。萃取时间为3小时、夹带剂(95%乙醇)用量为装料量的40%。 详细研究了超临界流体萃取物和各种有机溶剂提取物的抗氧化活性,发现了它们的活性差异和相似的作用规律。 利用电子顺磁共振和自旋捕捉技术及化学发光技术,对迷迭香中五种抗氧化活性成分鼠尾草酸、鼠尾草酚、迷迭香酚、表迷迭香酚、异迷迭香酚分别清除X/XO体系产生的O2(?)、兔肝微粒体产生的脂质自由基的作用进行了研究,结果表明,五种化合物的活性都有量效关系,并有饱和现象。比较五种化合物清除O2(?)和脂质自由基的IC50值,可知其活性大小顺序为:对于O2(?),用ESR法检测,鼠尾草酸>异迷迭香酚>迷迭香酚>表迷迭香酚>鼠尾草酚;用CL法检测,异迷迭香酚>鼠尾草酸>迷迭香酚>表迷迭香酚>鼠尾草酚;对于脂质自由基,鼠尾草酸>异迷迭香酚>迷迭香酚>表迷迭香酚>鼠尾草酚。对鼠尾草酸、鼠尾草酚清除Fenton反应产生的·OH的研究表明,鼠尾草酸的活性要大于鼠尾草酚。对DNA损伤的保护作用研究表明,五种化合物除鼠尾草酚外都有不同程度的保护DNA免受损伤的作用,它们抑制DNA损伤发光的IC50值分别为鼠尾草酸17.83μmol/L、迷迭香酚、2.63μmol/L、表迷迭香酚10.43μmol/L、异迷迭香酚1.96μmol/L,鼠尾草酚在实验浓度范围内对DNA的损伤发光没有抑制作用。通过量子化学计算确定了五种化合物的活性位点,用LUMO与HOMO之差很好地解释了五种化合物的清除O2(?)和脂质自由基的活性顺序。 对迷迭香提取物有效成分含量与抗氧化活性关系研究发现,鼠尾草酸的含量与各种提取物的抗氧化活性有显著的正相关性,总体趋势是:鼠尾草酸的含量越高,活性越强,因此,鼠尾草酸是各种提取物的主要有效成分,起主要作用;鼠尾草酚有一定的含量,对活性的贡献起次要作用。单体活性研究表明,迷迭香酚、表迷迭香酚、异迷迭香酚有相当强的抗氧化活性,也是迷迭香抗氧化活性的有效成分。因此,确定了以鼠尾草酸为主,鼠尾草酚、迷迭香酚、表迷迭香酚、异迷迭香酚为辅的迷迭香抗氧化活性的物质基础。 研究了迷迭香提取物的HPLC指纹图谱的建立方法,确立了指纹图谱与提取工艺的关系,为迷迭香产品的全面质量控制找到了新途径;并对指纹图谱与迷迭香抗氧化活性的关系进行了有益的探讨,从整体水平上解释了迷迭香提取物的活性差异,首次探讨了中药化学成分的谱效关系。 大鼠心肌缺血保护作用研究表明,鼠尾草酸和SFE提取物对垂体后叶素引起的大鼠心肌缺血有显著保护作用。 利用研究成果开发出了一种迷迭香抗氧化保健品。
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