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[目的] 研究枸杞多糖(Lycium barbarum polysaccharides,LBP)对热应激所致睾丸生精细胞凋亡相关蛋白Bax、Caspase-3和细胞色素C(cytochrome c,Cyt C)以及胞浆内CytC浓度的影响,探讨枸杞多糖在热应激所致睾丸生精细胞凋亡进程中所起的保护作用及其作用机制。 [方法] 成年雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠90只,随机分为5组:正常对照组、热应激组(HS)、枸杞多糖高(HLBP)、中(MLBP)、低(LLBP)剂量组[剂量分别为100mg/(kg·d)、50mg/(kg·d)、10mg/(kg·d)],每组18只。各组再按热应激后24h、48h和7d随机分成3个亚组,每组6只大鼠。枸杞多糖组大鼠给予以上剂量的枸杞多糖灌胃,每天一次,连续14d。正常对照组和热应激组给予等量生理盐水灌胃。于第15d,热应激组和枸杞多糖组大鼠予43℃恒温水浴30min,对照组浸于22℃水浴中30min。热应激后24h、48h和7d颈椎脱臼处死大鼠,取出睾丸。采用HE染色检测睾丸组织形态学改变,末端DNA转移酶缺刻末端标记法(TdT-mediated dUDP nick end labeling,TUNEL)检测生精细胞凋亡,免疫组化法检测Bax、Caspase-3和Cyt C蛋白的表达,采用酶联免疫吸附法(ELISA)测睾丸组织胞浆Cyt C的浓度。 [结果] 1.组织学观察:与正常组比较,热应激后大鼠睾丸组织生精上皮变薄,生精细胞排列紊乱,数量减少,生精小管明显缩小。与热应激组比较,枸杞多糖组生精上皮明显增厚,生精细胞排列紊乱较轻,生精细胞数量增多,并且LBP组大鼠体重(应激后48h、7d)、睾丸重量、睾丸指数及生精小管直径明显增加(P<0.05),以10mg/(kg.d)组增加最为显著。 2.TUNEL法检测生精细胞凋亡:对热应激后睾丸生精细胞的凋亡指数(apoptotic index,AI)进行分析,发现热应激后,热应激组和LBP组AI明显增加(P<0.05),但各LBP组AI均比热应激组明显降低(P<0.05),以10mg/(kg.d)剂量组效果最明显。 3.睾丸生精细胞凋亡蛋白Cyt C、Bax、Caspase-3的表达情况:与热应激组比较,各LBP组Cyt C、Bax、Caspase-3的表达均明显降低(P<0.05),以10mg/(kg.d)剂量组效果最明显。 4.睾丸组织胞浆内细胞色素C浓度的变化情况:与热应激组比较,各LBP组胞浆内CytC的浓度明显降低(P<0.05),以10mg/(kg.d)剂量组效果最明显。 [结论] 1.枸杞多糖能使热应激后睾丸组织生精上皮明显增厚,生精细胞排列紊乱较轻,生精细胞数量增多,生精小管增大,并且能增加热应激后的大鼠体重、睾丸重量、睾丸指数及生精小管直径。 2.枸杞多糖预处理能降低生精细胞Cyt C、Bax、Caspase-3蛋白的表达,降低睾丸组织胞浆内细胞色素C浓度,抑制生精细胞的凋亡,推断LBP可能通过抑制Bax的活化,从而抑制Cyt C自线粒体释放到胞浆,进而减少Caspase-3的活化,通过线粒体途径减轻热应激所致睾丸组织的损伤而起到保护睾丸组织的作用。