论文部分内容阅读
研究目的:多种驱动蛋白与肿瘤的发生发展有着密切联系,人们对于驱动蛋白KIF26B在肿瘤中的表达和相关机制知之甚少。本研究的目的在于探索驱动蛋白KIF26B在结直肠癌中的表达水平、临床意义以及表达机制。方法:1、我们在前期课题相关研究和生物信息学分析的基础上,采用Real Time PCR和Western Blot实验技术检测KIF26B在40例结直肠癌手术标本及对应正常粘膜中的表达水平。2、在含88例结直肠癌标本的组织芯片上,通过免疫组化染色检测KIF26B的表达情况。探索KIF26B的表达与临床病理参数的关系,Kaplan-Meier法分析KIF26B的表达与患者生存概率的关系,COX比例风险回归模型分析KIF26B表达与患者预后的关系。3、构建KIF26B Sh RNA慢病毒载体工具,获得KIF26B稳转敲减的结直肠癌细胞系,采用Real Time PCR、Western Blot、CCK-8、平板克隆形成、裸鼠成瘤等多种体外体内实验方法检测KIF26B敲减对结直肠癌细胞生物学行为的影响。结果:1、在40例结直肠癌组织样本中有30例(75%)KIF26B m RNA的表达水平较正常组织明显升高,Western Blot实验结果显示结直肠癌组织中KIF26B蛋白表达水平较正常粘膜组织明显升高(2.33±0.07 vs 0.91±0.04,P<0.05)。2、免疫组化染色显示KIF26B在结直肠癌组织中表达升高,与肿瘤大小(P=0.020)、AJCC分期(P=0.018)、T分期(P=0.026)、N分期(P=0.014)相关;生存分析显示KIF26B表达高组总体生存率低于KIF26B低表达组;多因素回归分析显示KIF26B是结直肠癌患者不利预后的独立影响因子。3、成功构建了KIF26B Sh RNA表达质粒,体内外实验中,敲减KIF26B的表达能够明显抑制结直肠癌细胞的细胞增殖能力、克隆形成能力、裸鼠成瘤能力。结论:结直肠癌组织中驱动蛋白KIF26B表达水平增高,与多种病理参数相关,KIF26B是结直肠癌患者不利预后的独立影响因子,其表达水平越高生存风险越高,提示KIF26B与结直肠癌发生发展密切相关。抑制KIF26B的表达能在体内外够减弱结直肠癌细胞的增殖活性,KIF26B有可能成为肿瘤治疗的分子靶点。