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一、目的探索秦皮甲素的提取、分离和纯化工艺,并研究其对慢性高尿酸血症模型小鼠尿酸水平和肾功能的影响。二、方法1.秦皮甲素热浸提工艺研究通过单因素实验和正交实验探讨从秦皮中浸提秦皮甲素的最佳工艺,考察乙醇浸提过程中乙醇浓度、料液比、浸提时间、浸提次数以及浸提温度对秦皮甲素转移率的影响。2.秦皮甲素纯化工艺研究采用大孔树脂和重结晶相结合的方法分离纯化秦皮提取液中的秦皮甲素。通过HPD100、HPD400、HPD500、D101、ADS-7、ADS-17、AB-8这七种大孔吸附树脂对秦皮甲素的纯化效果进行静态实验和动态实验考查,探索纯化秦皮甲素最适合的树脂和最佳的上样条件。3.秦皮甲素对慢性高尿酸血症模型小鼠尿酸水平的影响研究36只昆明种雄性小鼠饲养一周后,随机平均分为6组,依次为空白组、模型组、秦皮甲素高(200mg/kg)、中(100mg/kg)、低(50mg/kg)剂量组以及阳性药物别嘌醇对照组(50mg/kg)。模型组、阳性对照组、秦皮甲素高中低剂量组给予黄嘌呤600mg/kg(ig.)+氧嗪酸钾100mg/kg (ip.)造模,空白组给予同等剂量生理盐水。秦皮甲素高、中、低剂量组采用秦皮甲素混悬液进行灌胃给药,阳性对照组灌胃给予别嘌醇混悬液50mg/kg,模型组和空白组则灌胃给予同等体积的生理盐水,连续7日。于第七日下午给药1h后,摘眼球取各组动物的血样,离心吸取血清采用全自动生化分析仪检测血中尿酸(BUA)、肌酐(CR)和尿素氮(BUN)值,考察秦皮甲素对慢性高尿酸血症模型小鼠BUA、CR、BUN的影响以及对小鼠肾功能的影响。三、结果1.秦皮甲素乙醇浸提工艺研究通过比较各因素对秦皮甲素转移率的影响,秦皮甲素最佳的浸提工艺条件为:乙醇浓度75%,料液比为1:10,浸提温度为65℃,浸提次数为2次,浸提时间为2h/次。2.秦皮甲素纯化工艺研究根据实验结果,本课题选用树脂ADS-7为分离纯化秦皮甲素的最佳分离树脂。最佳上样条件为:上样浓度为0.192mg/mL,最大上样量为4.02mg/g,先以3倍柱体积(3BV)的水洗去杂质,再用30%的乙醇进行洗脱,收集30%乙醇洗脱液的前半部分,放入冰箱中冷藏保存24小时,重结晶后过滤,室温下放置干燥,秦皮甲素纯度可达到97%以上。3.秦皮甲素对慢性高尿酸血症模型小鼠尿酸水平的影响研究结果显示模型组和空白组相比,小鼠的BUA明显升高,差异具有显著性(P<0.01),提示造模成功。与模型组比较,秦皮甲素高、中、低剂量组均能显著降低高尿酸血症模型小鼠的BUA值,且秦皮甲素中、高剂量组能够将高尿酸血症模型小鼠的BUA值降低到正常值以下,其抑制率分别为63.45%和80.69%。模型组CR高于空白组,差异具有显著性(P<0.01),秦皮甲素高、中、低剂量组CR略高于空白组,差异无显著性。模型组、秦皮甲素高、中、低剂量组与空白组相比,BUN差异均无显著性。阳性对照别嘌醇组小鼠的CR和BUN均明显高于空白组和模型组以及秦皮甲素高、中、低剂量组,差异具有显著性(P<0.01)。四、结论本课题所优化的秦皮甲素提取纯化工艺提取效果好,制备工艺简单,分离纯度高,为秦皮甲素的工业化生产提供了实验依据。药效学研究表明秦皮甲素具有显著的降尿酸作用,对小鼠肾功能无影响,其用药安全性显著高于别嘌醇。图20幅,表12个,参考文献54篇。