【摘 要】
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聚己内酯(PCL)是一种生物高分子材料,被广泛地应用于各种生物医学领域。为了增强聚己内酯的生物相容性,需要在聚己内酯材料表面进行肝素化修饰,使肝素以共价键的形式稳定地结
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聚己内酯(PCL)是一种生物高分子材料,被广泛地应用于各种生物医学领域。为了增强聚己内酯的生物相容性,需要在聚己内酯材料表面进行肝素化修饰,使肝素以共价键的形式稳定地结合在聚己内酯表面。通过终点固定的方法,利用醛基和氨基发生席夫碱反应,把肝素固定在聚己内酯材料表面。用甲苯胺蓝染色法测得肝素固定化效率为6μg/cm~2。用X射线光电子能谱(XPS)和傅里叶红外光谱进一步检测分析材料结构。XPS分析发现肝素化聚己内酯材料表面增加了氮、硫、钠等元素信号;傅里叶红外光谱分析表明该材料增加了C-N和N-H振动峰。这些实验证明肝素已经与聚己内酯形成了共价结合。为了研究固定化肝素的结构和功能,本文还构建了gor trxB缺陷型大肠杆菌,用该菌株表达了五种肝素修饰酶。谷胱甘肽还原酶(Gor)和硫氧还蛋白还原酶(TrxB)是氧化还原体系中重要的两种酶,敲除trxB基因和gor基因能阻断大肠杆菌细胞内的氧化还原途径,增强二硫键的形成,保证外源蛋白的正常折叠。本文通过λ-red重组系统敲除大肠杆菌中的gor和trxB基因,构建了gor trxB缺陷型菌株;利用gor trxB缺陷菌株表达纯化出四种硫酸转移酶和C5差向异构酶。这四种硫酸转移酶和C5差向异构酶可用于后续探索肝素化聚己内酯材料的结构和生物学活性。终点固定法能够把肝素分子有效地固定在聚己内酯材料表面,为进一步研究该材料的功能和应用奠定了基础。
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