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目的:观察瘦素对小鼠胸腺细胞凋亡的保护机制,探讨磷酸肌醇3羟基激酶/AKT (PI3-K/AKT)和胞浆型磷脂酶A2(cPLA2)信号转导通路是否参与瘦素保护机制,并探讨瘦素抗凋亡机制,为临床治疗提供实验依据。方法: 1以LPS诱导小鼠胸腺细胞凋亡为模型,用MTT法检测不同浓度瘦素对LPS诱导胸腺细胞毒性的影响,并采用Annexin V/PI双染色法流式细胞仪检测不同浓度瘦素对LPS诱导胸腺细胞凋亡的影响。2 RT-PCR检测瘦素对小鼠胸腺细胞caspase3 mRNA表达的影响,实验分为对照组、LPS刺激组、LPS+leptin组。3采用Annexin V/PI双染色法流式细胞仪检测PI3-K/AKT特异性抑制剂LY294002和cPLA2特异性抑制剂AACOCF3对小鼠胸腺细胞凋亡的影响。4 RT-PCR检测瘦素对小鼠胸腺细胞cPLA2 mRNA表达的影响,且cPLA2活性试剂盒检测瘦素对cPLA2活性的影响。结果: 1瘦素可呈剂量依赖性的减弱LPS对胸腺细胞的毒性作用,流式细胞仪检测表明瘦素可抑制LPS诱导的细胞凋亡,其浓度为200ng/ml时有统计学意义(P<0.05)。2 RT-PCR结果显示加入瘦素后caspase3 mRNA的表达下降(P<0.05),说明瘦素可通过下调caspase3 mRNA表达来抑制小鼠胸腺细胞凋亡。3流式细胞仪检测结果显示瘦素可以减少LPS诱导的小鼠胸腺细胞凋亡,使胸腺细胞存活率由58%上升到65% (P<0.05),LY294002 (10μmol/L)可以明显抑制瘦素的保护作用,使胸腺细胞的存活率降至60% (P<0.05)。说明瘦素可依赖PI3-K/AKT途径参与对小鼠胸腺细胞凋亡的保护。4流式细胞仪检测结果显示LPS可明显诱导胸腺细胞凋亡(P<0.05),加入cPLA2特异性抑制剂AACOCF3后,可看到LPS诱导的凋亡率有所降低,与LPS刺激组相比,差异有显著性(P<0.05),说明LPS可部分依赖cPLA2途径诱导胸腺细胞凋亡。同时RT-PCR结果显示瘦素可上调cPLA2 mRNA的表达,cPLA2活性试剂盒显示leptin可抑制cPLA2的活性,差异有显著性(P<0.05),说明瘦素对抗LPS诱导的小鼠胸腺细胞凋亡部分依赖cPLA2途径。结论:1瘦素对LPS诱导的胸腺细胞凋亡有一定的抑制作用,提示瘦素可能参与免疫调节。2瘦素抑制LPS诱导的胸腺细胞凋亡同时依赖PI3-K/AKT和cPLA2途径。3 caspase3介导瘦素抗凋亡机制。