随着器官、骨髓和干细胞移植的大量开展，恶性肿瘤病人发病人数增加和生存期延长导致免疫功能低下患者的数量不断增加，广谱抗菌药物、免疫抑制剂等的广泛使用，导管留置操作的普及，以及因严重疾病和大手术住在重症监护病房时间延长，使得侵袭性真菌感染(Invasivefungalinfections，IFI)的发病率不断升高。由于缺乏特异性临床特征，血液真菌分离培养敏感性很低，IFI的病原学诊断十分困难。因此，迫切需要研究建立快速、简便，敏感性强、特异性高的非培养诊断方法来改善侵袭性真菌感染的病原学诊断。　　 研究目的：　　 利用本实验室前期研究中筛选并制备的与念珠菌和曲霉侵袭性感染相关的三种重组蛋白，建立低密度蛋白质芯片法，检测临床病人血清标本中相应的特异性抗体;评估该方法对侵袭性念珠菌病(IC)和侵袭性曲霉病（IA）诊断价值。　　 研究方法：　　 纯化白念珠菌烯醇化酶(Eno)、果糖二磷酸醛缩酶(Fba1)和烟曲霉硫氧还蛋白还原酶(TR)三种重组蛋白。分别对点样缓冲液、抗原固定条件和封闭方式进行优化;同时对Eno，Fba1和TR三种真菌抗原的点阵浓度和待测血清稀释度进行优化，确定其最佳的反应条件。建立检测念珠菌、曲霉优势抗体的蛋白芯片，并对该方法的特异性、重复性和稳定性等方面进行考察。收集各类IC患者及IA患者血清，以定植感染者、细菌血症患者、其他真菌感染者及健康体检者血清为对照，用蛋白芯片法测定血清中的相应抗体，确定cut-off值，评估该法在侵袭性念珠菌病(IC)和侵袭性曲霉病(IA)诊断中的应用价值。　　 研究结果：　　 (1)以硝酸纤维素膜为固相载体，对点样缓冲液、抗原固定条件和封闭方式进行优化，确定以Tris-HC(l)缓冲液(pH8.5)为点样缓冲液、37℃湿盒孵育2h、5％脱脂奶粉封闭1h为最佳反应条件。在此基础上对Eno，Fba1和TR三种真菌抗原的点阵浓度和血清稀释度进行优化，最后确定:Eno、Fba1、TR点样浓度依次为0.5mg/mL、0.04mg/mL、1.0mg/mL，待测血清稀释度为1∶10。　　 (2)在研究结果(1)的基础上，建立检测念珠菌、曲霉优势抗体的蛋白芯片，对其进行方法学考核，结果显示该方法特异性及重复性良好，将该芯片置于4℃保存，75d内用于检测，检测结果未见明显变化。　　 (3)以建立的蛋白芯片法测定IC、IA患者血清中的相应抗体，以66.5、29.5、58.5作为抗Eno、抗Fba1、抗TR的cut-off值，结果抗Eno抗体和抗Fba1抗体对诊断IC的敏感性和特异性分别为67.6％(71/105)和96.5％(299/310),64.8％(68/105)和90.3％(280/310)。通过联合检测抗Eno抗体和抗Fba1抗体，可将敏感性提高至81％。抗TR抗体对诊断IA的敏感性为71.4％(31/42)，特异性为98.2％(5/285)。　　 结论：　　 成功制备了检测念珠菌、曲霉优势抗体的蛋白芯片，在此基础上建立了检测患者血清中抗Eno抗体、抗Fba1抗体及抗TR抗体的蛋白芯片法，该方法在IC、IA诊断中具有潜在应用价值。