论文部分内容阅读
目的： 本文选用ApoE基因敲除(apolipoprotein E gene knock out，ApoE-/-)小鼠作为研究对象。旨在讨论菲牛蛭对ApoE-/-小鼠血脂水平以及动脉粥样硬化斑块内相关蛋白和基因的表达，以探讨菲牛蛭抗动脉粥样硬化的可能机制。 方法： 本文选用15周龄雄性ApoE-/-小鼠高脂饲料喂养5周建立动脉粥样硬化的小鼠模型。后将ApoE-/-小鼠随机分为模型组Mol(n=8)、为菲牛蛭粉高剂量组HPH(200mg.kg-1.d-1，n=8)、菲牛蛭粉低剂量组HPL(75mg.kg-1.d-1，n=8)、辛伐他汀组Sim(3mg.kg-1.d-1，n=8)、菲牛蛭素高剂量组BDH(400U.kg-1.d-1，n=8)、菲牛蛭粉低剂量组BDL(200U.kg-1.d-1，n=8);C57BL/J6作为空白对照组Con(control group，n=8)，给药时间为10周。10周后检测实验指标如下: 1.测定各组小鼠的血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)的水平; 2.通过HE染色，观察各组小鼠主动脉根部粥样硬化斑块情况; 3.通过Masson染色，观察各组小鼠主动脉根部粥样硬化斑块内胶原含量情况; 4.运用免疫组化半定量法检测各组小鼠主动脉内CD34、VEGF、VEGFR-2、HIF-1α的蛋白表达情况 5、运用实时定量RT-PCR检测各组小鼠主动脉中的VEGF、HIF-1α和VEGFR-2mRNA表达情况。 结果： 血脂水平结果显示:与模型组相比，辛伐他汀组、菲牛蛭粉大剂量组、菲牛蛭粉小剂量组、菲牛蛭素大剂量组、菲牛蛭素小剂量组均能降低小鼠中TC、TG、LDL-C的水平（P＜0.05或者P＜0.01）。而与模型组相比，菲牛蛭粉大剂量组、菲牛蛭粉小剂量组、辛伐他汀组能升高HDL-C水平(P＜0.05或者P＜0.01)而菲牛蛭素大剂量组、菲牛蛭素小剂量组能降低HDL-C水平(P＜0.05)。 (1)HE染色结果显示管腔内的病理结构，模型组中出现血管壁增厚，出现大量坏死组织、泡沫细胞，形成斑块。与模型组相比，各个治疗组以上斑块情况均有改善。 (2)Masson染色结果显示:各组斑块中胶原含量分别为21.5±2.44％（模型组）、51.7±2.47％（菲牛蛭素大剂量组）、45.9±4.12％（菲牛蛭素小剂量组）、37.7±3.33％（辛伐他汀组）、31.6±4.80％（菲牛蛭粉大剂量组）、26.0±2.10％（菲牛蛭粉小剂量组），与模型组比较各个治疗组均有统计学差异(P＜0.01) (3)CD34免疫组化结果显示:与正常对照组相比较，模型组与各个治疗组中的CD34含量均高于对照组(P＜0.01);与模型组相比，各个治疗组中的CD34含量均明显减少（P＜0.05或者P＜0.01）.菲牛蛭粉大剂量组与菲牛蛭粉小剂量组间有显著差异(P＜0.05) (4) VEGF免疫组化结果显示:与正常对照组相比较，模型组与各个治疗组中的VEGF含量均高于对照组(P＜0.01);与模型组相比，各个治疗组中的VEGF含量均明显减少（P＜0.05或者P＜0.01）;菲牛蛭素大剂量组和菲牛蛭素小剂量组之间有显著差异(P＜0.05);菲牛蛭粉大剂量组、菲牛蛭粉小剂量组间有显著差异(P＜0.05) (5) VEGFR-2免疫组化结果显示:与正常对照组相比较，模型组与各个治疗组中的VEGF含量均高于对照组(P＜0.01);与模型组相比，各个治疗组中的VEGF含量均明显减少(P＜0.01); (6) HIF-1α免疫组化结果显示:与正常对照组相比较，模型组与各个治疗组中的HIF-1α含量均高于对照组(P＜0.01);与模型组相比，各个治疗组中的HIF-1α含量均明显减少(P＜0.01);菲牛蛭素大剂量组和菲牛蛭素小剂量组之间有显著差异(P＜0.01);菲牛蛭粉大剂量组与菲牛蛭粉小剂量组之间无明显差异(P＞0.05) (7) RT-PCR结果显示，VEGF mRNA表达比较:与正常对照组相比，模型组小鼠血管壁VEGF mRNA表达显著升高(P＜0.01);与模型组相比，各药物干预组血管壁VEGR mRNA表达均明显下降(P＜0.01) (8) RT-PCR结果显示，VEGFR-2mRNA表达比较:与正常对照组相比，模型组小鼠血管壁VEGFR-2mRNA表达显著升高(P＜0.01);与模型组相比，各药物组血管壁VEGFR-2mRNA表达均明显下降(P＜0.01) (9) HIF-1α mRNA表达比较:与正常对照组相比，模型组小鼠血管壁HIF-1α mRNA表达显著升高(P＜0.01);与模型组相比，各药物组血管壁HIF-1α mRNA表达均明显下降(P＜0.01);其中菲牛蛭素大剂量组下降最为显著(P＜0.01);辛伐他汀组表达均低于菲牛蛭粉大剂量组和菲牛蛭粉小剂量组(P＜0.01) 结论： 1、菲牛蛭能够降低ApoE-/-小鼠的血脂水平。 2、菲牛蛭能抑制动脉粥样硬化斑块形成，增加斑块内胶原，增加动脉粥样硬化斑块的稳定性，其中菲牛蛭素效果明显。 3、菲牛蛭能抑制动脉粥样硬化斑块中的血管新生，抑制血管新生相关基因VEGFmRNA、VEGFR-2mRNA、HIF-1α mRNA以及相应蛋白的表达。