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目的:
1．研究浙江地区汉族人线粒体DNA(mtDNA)D-Loop区基因和剑桥标准序列之间的差异，并筛查与家族性鼻咽癌相关的突变位点。
2．通过分析线粒体DNA的D-LOOP区序列来研究在家族性鼻咽癌中的线粒体D-LOOP区的序列变异和患癌风险之间可能的联系。
方法:
1．收集4个浙江家族性鼻咽癌家族中的29名成员的外周血，包括7名家族性鼻咽癌患者(familialnasopharyngealcarcinoma，下文以FNPC表示)和22名家系成员(unaffectedpedigreemember，下文以UAPM表示)，并随机选取20例散发性鼻咽癌患者(sporadicnasopharyngealcarcinoma，下文以SNPC表示)和122例止常人(normrlcontrol，下文以NC表示)作为对照。分别对各组D-1oop区突变情况进行分析，所有受试对象的临床特征包括年龄、性别、吸烟、组织学类型以及临床TNM分期无显著性统计学意义(P＞0.05)，详见(表1)。
2．从外周血中分别提取线粒体DNA和核基因组DNA，用特定的针对整个D-LOOP基因区域的两对引物扩增出PCR产物并纯化。
3．对PCR纯化产物直接测序分析。使用生物信息学软件(CodonCodeAligner2.0.6software和Chromas)进行比对分析，查找变异位点。
4．利用one-wayANOVA和Chi-squaretestorFishersexacttest进行统计分析。
结果:
1．通过与对照组及标准序列比较，在49例实验组和122例对照组，分别有74个和129个变异位点，在FNPC，UAPM，SNPC和NC组中，总的突变数分别为67，197，186和832(详见表2和表5)，在74个变异位点中，90.5％是同质性突变，只有9.5％(7/74)为异质性突变。其中有6个为新发现的突变，分别为186位点C→G,206位点T-G,310位点T→CCT,314位点C-CCins(n)，556位点A→Tand16526位点G→T。另外存在4个高频变异位点分别是np73A-G,np263A-G,np489T-C和np16223C-T。
2．我们对所有受试者的血液标本进行np16362和的序列变异进行分析，发现在FNPC，UAPM，SNPC和NC组中，其变异率分别为100％，81.8％，20.0％，和32.8％，与对照组NC比较，FNPC和UAPM(100％，81.8％)两组存在显著性差异(P＜0.05)(详见表3)。而SNPC(20.0％，4/20)组与对照组NC(32.8％，40/122)之间无统计学差别(P＞0.05)。np16519位点的变异率分别表现为0，22.7％，15％，和46.7％在FNPC，UAPM，SNPC，和NC组中。与对照组NC比较，统计分析发现实验组间具有显著性差异(P＜0.05)。
3.对所有标本的D310区和np16183-16194区进行MSI分析显示，实验组中分别有46例和14例存在MSI，与对照组NC(53.3％)比较，D310区发生MSI的频率有统计学意义，且其碱基变异率统计学表现一致(详见表4)。而在np16183-16194区没有表现统计学上差别。
结论:
1．线粒体D-LOOP基因区域存在大量变异位点，推测多为多态性现象。
2．与正常对照组比较，在鼻咽癌患者及家系成员中D-LOOP基因的序列变异明显增加，表明随着变异的增多与患癌的风险成正相关，这将需要增大样本量和增加样本类型来进一步证实。
3．线粒体DNA的np16362T-C、np16519T-C、D310区微卫星变异可能与家族性鼻咽癌的易感性有一定的相关性，并有望成为早期检测家族性鼻咽癌易感性的分子标记。