膜联蛋白A3在骨肉瘤细胞系HOS中的表达及意义

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目的:探讨膜联蛋白A3(Annexin A3、ANXA3)在骨肉瘤细胞系HOS与成骨细胞系中的表达差异及意义,寻求针对骨肉瘤靶向治疗的新方法。方法:首先应用细胞免疫荧光证实ANXA3是否在骨肉瘤细胞中表达,再采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot法分别检测ANXA3在成骨细胞系及骨肉瘤细胞系HOS和U2OS细胞中的表达水平,再通过脂质体介导的方法将小干扰RNA(siRNA)转染到HOS细胞系中,下调HOS细胞系中ANXA3的表达。将siRNA转染进HOS细胞6小时后通过荧光显微镜观察siRNA转染进入HOS细胞情况,转染48小时后收集细胞,提取细胞中总蛋白后通过Western blot法检测转染48小时后HOS细胞中ANXA 3的蛋白表达情况,确定ANXA3在骨肉瘤细胞系HOS中表达下调,再通过流式细胞术检测转染前后HOS细胞的凋亡率。结果:1.通过激光共聚焦显微镜观察到ANXA3在骨肉瘤细胞中表达;2.通过RT-PCR、Western blot检测成骨细胞与骨肉瘤细胞中ANXA3表达量,发现ANXA3在骨肉瘤细胞系HOS及U2OS中RNA水平和蛋白表达水平均较成骨细胞系显著升高、而HOS中ANXA3的水平升高更明显;3.将3种si RNA转染至HOS细胞系后,通过Western blot检测HOS细胞的转染效率,结果显示各实验组ANXA3表达均明显下调;4.通过流式细胞术检测转染前后HOS细胞的凋亡情况,结果显示转染后各组凋亡率较转染前均明显增加。结论:ANXA3在骨肉瘤细胞系中高表达,下调HOS细胞中ANXA3的表达可使其凋亡增加。
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