超高压提取落叶松中阿拉伯半乳聚糖及其药理活性研究

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阿拉伯半乳聚糖(Arabinogalactan,AG)为阿拉伯糖与半乳糖组成的中性多糖,具有抗病毒、抗肿瘤、抗氧化等生物活性。超高压提取法有着简便快捷高效的特点,其原理为,对原料液迅速施加巨大的流体静压力,使细胞内溶物和提取溶剂充分接触,从而达到快速、高效地提取目的。本实验通过单因素实验确立了超高压提取落叶松中阿拉伯半乳聚糖的条件区间,通过响应面曲线法优化提取工艺,实验结果为:提取压力253mpa,保压时间为9.7min,液固比为5:1,在此条件下得到最佳人参皂苷含量为10.97%。
  大量实验表明,通过对多糖的修饰可以增强其自身活性。在本次试验中,通过浓硫酸酯化法对AG进行分子修饰,并通过单因素实验确定了最佳酯化条件区间,使用响应面曲线法得到AG硫酸酯化最佳工艺,用取代度(DS)来评估酯化效率,用氯化钡-明胶比浊法通过紫外分光光度计测定DS.实验结果为:在反应时间30min,硫酸铵加入量为0.2485g,浓硫酸与正丁醇体积比为1.113:1的条件下进行酯化时,硫酸根取代度最大,为:DS=1.23。三个因素对超高压提取阿拉伯半乳聚糖得率的影响:硫酸化反应时间对取代度的影响最大,浓硫酸与正丁醇体积比次之,硫酸铵加入量影响最小。
  急性肝损伤是在短期内遭受多种不良刺激导致的肝功能异常。研究表明,氧化应激也是急性肝损伤出现的原因之一。Nrf-2信号通路是氧化应激的关键通路之一,主要通过上调通路中的抗氧化关键蛋白的表达来提高机体的抗氧化能力。正常情况下,Nrf-2能与Keap1结合绑定,当机体在自由基的刺激下,Nrf-2与Keap1分离,随后进入细胞核中,激活细胞核中的磷酸酰胺腺嘌呤二核苷酸醌氧化还原酶(NQO-1)和血红素氧合酶(HO-1),而使巨噬细胞的活性提高,起到抗炎抗氧化的作用,从而抑制急性肝损伤的出现。本实验通过免疫蛋白印迹法探究了对肝脏Nrf-2信号通路中的关键蛋白的表达量进行测定。结果显示,AG给药组均能显著下调Keap1的蛋白表达量,上调Nrf-2、NQO-1、HO-1蛋白表达量,结果均具有显著差异性。说明AG能够通过激活Nrf-2途径来提高机体的抗氧化能力,并以此减少急性肝损伤对机体的伤害。
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