目的:结直肠癌(Colorectal cancer,CRC)是目前全球最常见恶性肿瘤之一,其发病率居全球第3位,呈现逐年上升的趋势。手术切除仍是目前治疗结直肠癌的主要方式,术后辅以放化疗,使结直肠癌治疗取得较明显的进步,但患者长期生存情况仍然较差。F-box蛋白7(F-box protein 7,FBXO7)是新发现的F-box蛋白家族成员之一,F-box家族参与组成SKP1-CUL1-F-box(SCF)复合物,是泛素化系统的重要组成部分。目前国内外学者对于FBXO7的研究不多,并且主要都集中在帕金森病,而在肿瘤领域中的研究较少。本实验目的是初步探讨过表达FBXO7基因对结直肠癌细胞生物学行为影响及机制。方法:1.过表达FBXO7重组质粒(GV230-FBXO7)转染人结直肠癌细胞株HCT116和SW620,构建过表达FBXO7的结直肠癌细胞。2.荧光定量PCR和Western blot法检测过表达FBXO7的结直肠癌细胞HCT116和SW620中FBXO7 mRNA水平及蛋白表达情况。3.CCK-8检测过表达FBXO7后对结直肠癌细胞HCT116和SW620体外增殖能力的影响。4.流式细胞仪检测过表达FBXO7的结直肠癌细胞HCT116和SW620细胞周期的变化情况,Western blot实验检测过表达FBXO7对结直肠癌细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)表达水平的影响。5.划痕实验检测过表达FBXO7结直肠癌细胞HCT116和SW620迁移能力变化。6.Transwell侵袭实验检测过表达FBXO7结直肠癌细胞HCT116和SW620侵袭能力改变。结果:1.实时荧光定量PCR检测结果显示,在两株结直肠癌细胞中,实验组FBXO7的mRNA相对表达水平(P﹤0.01)均明显高于对照组。Western blot法检测结果显示,与对照组相比,实验组FBXO7蛋白表达水平明显增强。2.CCK-8检测结果显示,在两株结直肠癌细胞中,与对照组相比,过表达FBXO7实验组的结直肠癌细胞在48h、72h、96h,OD值均增加,表明FBXO7可以促进结直肠癌细胞的增殖。3.流式细胞仪检测结果显示,在两株结直肠癌细胞中,与对照组相比,实验组细胞的G1期比例减少,而S期比例增加。4.实时荧光定量PCR检测结果显示,过表达FBXO7实验组的结直肠癌细胞中Cyclin D1的mRNA(P﹤0.01)表达水平高于对照组。Western blot显示过表达FBXO7后结直肠癌细胞中Cyclin D1表达增加。5.划痕实验结果显示,与对照组相比,过表达FBXO7实验组的结直肠癌细胞在24h、48h迁移能力明显增强(P﹤0.05)。6.Transwell侵袭实验结果显示,与对照组相比,过表达FBXO7实验组的结直肠癌细胞穿过铺基质胶小室的数量明显增多(P﹤0.05)。结论:1.转染过表达FBXO7重组质粒,成功上调结直肠癌细胞HCT116和SW620中FBXO7的mRNA和蛋白表达水平。2.过表达FBXO7增强结直肠癌细胞HCT116和SW620体外增殖、迁移及侵袭能力。3.过表达FBXO7可以促进结直肠癌细胞HCT116和SW620由G1期进入到S期,促进细胞发生G1/S期转变、细胞周期蛋白Cyclin D1表达水平增加。