SATB2在颌骨骨髓间充质细胞特征性成骨分化中的调控作用

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[目的]骨髓间充质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)是一种多潜能干细胞,能分化成多种类型的细胞。然而,由神经嵴发育而来的颌骨骨髓间充质细胞(mandible bone marrow stromal cells,M-BMSCs)和由中胚层发育而来的胫骨骨髓间充质细胞(tibia bone marrow stromal cells,T-BMSCs)表现为不同的生物学特征,其中M-BMSCs表现为更强的成骨能力。最近研究发现SATB2在成骨分化过程中发挥重要的调控作用,本研究检测SATB2在M-BMSCs和T-BMSCs诱导成骨分化过程中的表达特点,分析SATB2对两种不同胚胎来源BMSCs成骨分化的影响,为进一步研究SATB2在M-BMSCs成骨分化过程中的调控机制提供理论基础,为将来利用SATB2促进颅颌面组织再生修复提供实验依据。[方法]1.全骨髓贴壁法培养M-BMSCs和T-BMSCs,三天后首次换液,除去混有的造血细胞,当形成的克隆相互接触融合时传代培养,培养至第三、四代完成后续实验;原代细胞培养10天后染色,对比分析两种细胞的克隆形成能力;MTT法检测两种细胞的增殖能力;免疫荧光法检测两种细胞特征性抗体标记。2.成骨诱导液培养M-BMSCs和T-BMSCs2周,对比分析两种细胞的成骨能力。分别于诱导3、5、7、9天后检测ALP活性,并且在诱导前和诱导7天后行ALP染色,比较两种细胞ALP的活性;分别于诱导7、10、14天后进行茜素红染色,比较两种BMSCs钙结节的形成能力。分别提取未诱导(0天)和诱导3、7、14天后两种细胞的mRNA,总蛋白和核蛋白,采用Real time PCR、WesternBlotting、免疫细胞化学方法检测Satb2,Hoxa2,Runx2,Ocn,Opn时空上的表达规律。[结果]1. M-BMSCs和T-BMSCs外形上以及某些标记物keratins K8,K18,E-cadherin,desmin,GFAP,vimentin, N-cadherin没有明确的差别,但是M-BMSCs具有较强的克隆形成能力和增殖能力。2.在诱导成骨分化过程中M-BMSCs表现出较强的ALP活性及较强的钙结节形成能力;成骨相关调控因子Runx2,Ocn,Opn在M-BMSCs成骨分化过程中表达激活早而且高。3. Satb2在M-BMSCs成骨分化过程中早期(3天)激活,而在T-BMSCs相对较晚(7天)激活,Satb2下游基因Hoxa2在M-BMSCs成骨分化过程中保持沉默,而在T-BMSCs诱导3天再次激活Hoxa2的表达。[结论]本实验进一步证实胚胎来源不同的BMSCs具有不同的成骨能力;SATB2在颌骨和胫骨BMSCs成骨分化中扮演不同的角色,与胫骨BMSCs相比,SATB2在颌骨BMSCs中早期(3天)激活,促使其下游成骨相关调控因子的表达,从而使颌骨BMSCs具有较强的成骨能力。
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