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前言本文通过检测基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase,MMP-2)及诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)mRNA在子宫内膜腺癌、不典型增生、正常子宫内膜组织中的表达情况,进一步阐明iNOS和MMP-2在子宫内膜腺癌发生、发展中的作用及其与临床病理特征间的关系,提示iNOS和MMP-2可作为衡量肿瘤恶行程度的潜在指标。方法1、标本的采集分组:标本来源于2006年3月-2007年10月于中国医科大学附属第一医院妇科就诊的患者70例,共分三组。第一组因子宫内膜癌行手术治疗的患者30例,平均年龄(54.7±7.0)岁,FIGO分期(Ⅰ期17例,Ⅱ期8例,Ⅲ期3例,Ⅳ期2例),分化程度(高分化14例,中分化9例,低分化7例),浸润深度(小于或等于肌层1/2者22例,大于肌层1/2者8例)。第二组经诊断性刮宫病理诊断为子宫内膜不典型增生的患者20例,平均年龄(51.7±9.7)岁,病理分期(轻度5例,中度13例,重度2例),因病例分布不均,病例数少,仅作为一组进行分析研究。第三组为同期在我科行子宫切除术且月经周期正常的子宫肌瘤患者(所取内膜均由病理证实为增生期内膜)20例,平均年龄(50.2±8.2)岁。三组患者均要求一年内无宫内置环史,3个月内未服用过激素类药物。对三组年龄间的差异用美国SPSS 13.0统计软件分析无显著性意义(F=1.98 P=0.146)。取材:于刮宫(或子宫离体)后5分钟内迅速取子宫内膜组织100毫克,立即置入液氮中冷冻,4小时后再转入-70℃低温冰箱保存备用。2、实验方法应用RT-PCR技术检测iNOS及MMP-2mRNA在子宫内膜腺癌、不典型增生及正常子宫内膜中的表达。步骤包括:(1)采用RNAout试剂说明书所提供的方法进行总RNA的提取。(2)按RT-PCR试剂盒说明配制反应体系后进行反转录反应(RT)及聚合酶链反应(PCR)。(3)mRNA表达的半定量分析。3、统计学分析将琼脂糖凝胶电泳呈像经图像分析系统转换成数值,以均数±标准差表示,并采用SPSS13.0软件进行t检验和直线相关分析。(检验水准α=0.05)结果1、子宫内膜腺癌、不典型增生及增生期子宫内膜中iNOS mRNA、MMP-2 mRNA的表达子宫内膜癌中iNOS mRNA的表达高于不典型增生组,二者之间的差异有显著性意义(P=0.0004)。不典型增生组的iNOS mRNA的表达水平明显高于增生期子宫内膜,两者差异有显著性意义(P=0.0002)。子宫内膜腺癌中MMP-2 mRNA的表达水平高于不典型增生组,但两者差异没有显著性意义(P=0.056)。而子宫内膜腺癌、不典型增生组的MMP-2 mRNA表达水平明显高于增殖期子宫内膜,差异有显著性差异(P=0.0001,P=0.0002)。2、子宫内膜腺癌中iNOS mRNA和MMP-2 mRNA的表达及其与临床病理特征间的关系晚期子宫内膜腺癌中iNOS mRNA的表达高于Ⅱ期,在Ⅱ期中的表达高于Ⅰ期,差异均有显著性意义(P=0.037,P=0.036)。iNOS mRNA的表达不仅与分期有关,其表达在不同组织分化中也有差异,在低分化子宫内膜腺癌中的表达高于中分化,在中分化中的表达高于高分化(P=0.048,P=0.018)。且与肌层浸润深度有关,在深度大于1/2的病例中的表达明显升高,差异有显著性意义(P=0.0001)。虽在有淋巴转移的3例子宫内膜腺癌中iNOS mRNA表达升高,但与无淋巴转移者间的差异没有显著性意义(P=0.052)。MMP-2 mRNA的表达与分期有关,在晚期子宫内膜腺癌中的表达高于Ⅱ期,Ⅱ期中的表达高于Ⅰ期,差异均有显著性意义(P=0.019,P=0.028),其表达在不同组织分化中也有差异,在低分化子宫内膜腺癌中的表达高于中分化,在中分化中的表达高于高分化(P=0.028,P=0.007)。且与肌层浸润深度有关,在深度大于1/2中的表达升高,其差异有显著性意义(P=0.0001)。在有淋巴转移3例子宫内膜腺癌中MMP-2 mRNA表达明显高于无淋巴转移者(P=0.025)。3、子宫内膜腺癌中iNOS mRNA和MMP-2 mRNA表达的相关性子宫内膜腺癌中iNOS mRNA和MMP-2 mRNA的表达之间有正的直线相关关系(r=0.801,P=0.008)。结论1、子宫内膜腺癌、不典型增生组织中iNOS、MMP-2 mRNA的表达水平明显高于增生期子宫内膜中的表达,说明子二者表达水平的增高与肿瘤的发生发展相关。2、子宫内膜腺癌中iNOS、MMP-2 mRNA表达水平随癌细胞分化程度的降低,肌层浸润加深和分期的升高而增加,说明二者的高表达促进了肿瘤的侵袭和转移。3、子宫内膜腺癌中iNOS、MMP-2 mRNA的表达有明显相关性,说明二者在子宫内膜癌的发生发展过可能存在协同作用。