【摘 要】
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目的:我们课题组前期已经证实了Ski在脊髓损伤(SCI)后星形胶质细胞中上调,并使用小干扰si RNA敲除Ski基因,发现敲除Ski后反应性星形胶质细胞的生理活性降低,因此认为Ski可能是SCI后反应性胶质瘢痕形成的调控因子,但其过表达在脊髓损伤后反应性星形胶质细胞增生和迁移中的功能及确切机制尚不清楚。本研究中,我们检测了Ski过表达后对反应性星形胶质细胞增殖和迁移能力的影响,以探明其中确切的分子
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目的:我们课题组前期已经证实了Ski在脊髓损伤(SCI)后星形胶质细胞中上调,并使用小干扰si RNA敲除Ski基因,发现敲除Ski后反应性星形胶质细胞的生理活性降低,因此认为Ski可能是SCI后反应性胶质瘢痕形成的调控因子,但其过表达在脊髓损伤后反应性星形胶质细胞增生和迁移中的功能及确切机制尚不清楚。本研究中,我们检测了Ski过表达后对反应性星形胶质细胞增殖和迁移能力的影响,以探明其中确切的分子机制。方法:提取出生1-3天的Sprague Dawley(SD)乳鼠大脑皮质星形胶质细胞,进行体外培养。脂多糖(LPS)诱导星形胶质细胞活化后,建立脊髓损伤反应性星形胶质细胞模型。采用Western bolt、RT-q PCR等实验方法检测正常及LPS诱导的脊髓损伤细胞模型的活化星形胶质细胞中Ski和增殖相关蛋白PCNA,CDK4以及Cyclin D1的蛋白表达和m RNA表达变化。并通过免疫荧光双重染色和Ed U细胞增殖技术检测Ski的表达及星形胶质细胞增殖情况。将Ski特异性慢病毒转染星形胶质细胞,使Ski基因过表达后用流式细胞技术、Ed U染色法和CCK-8检测细胞周期和增殖活力的变化,用划痕实验和Transwell实验检测Ski过表达对反应性星形胶质细胞迁移能力的应影响。与此同时,通过Western bolt和RT-q PCR实验检测Ski过表达后PI3K/Akt信号通路中相关蛋白的表达变化,并进一步使用PI3K通路抑制剂LY294002抑制该信号通路的激活,深入探索Ski过表达后增强反应性星形胶质细胞增殖和迁移能力的确切机制。结果:在LPS诱导的体外星形胶质细胞损伤模型中,Ski的m RNA和蛋白表达呈现时间依赖性增加,在4d时达到高峰。PCNA、CDK4和Cyclin D1细胞增殖蛋白在正常及活化星形胶质细胞中的表达变化规律与Ski相一致。Ski过表达后明显增强了反应性星形胶质细胞的增殖和迁移能力,而抑制PI3K/Akt通路活性后Ski及增殖相关蛋白的表达水平明显降低。结论:这意味着Ski是脊髓损伤后调控星形胶质细胞生物特性的新分子,在调控星形胶质细胞增殖方面具有重要作用。Ski过表达可以通过激活PI3K/Akt信号通路有效的促进反应性星形胶质细胞的增殖和迁移。这提示Ski可能是脊髓损伤后抗胶质瘢痕形成以及促进神经功能恢复的重要治疗靶点。
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