鼠疱疹病毒68转录激活蛋白(RTA)对下游基因转录调控机制的研究

来源 :中国科学院生物物理研究所 | 被引量 : 0次 | 上传用户:leihaibo880125
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鼠疱疹病毒68(MHV-68)与人类EB病毒(EBV)及卡波西肉瘤病毒(KSHV)一样同属Y疱疹病毒,它们在基因序列上具有较高同源性。由于EBV和KSHV为种属特异性病毒,仅能感染人类和某些灵长动物,进行动物实验有很大的限制。MHV-68能感染实验小鼠,体外能感染多种细胞,是研究Y疱疹病毒感染的一个良好的模型。   转录激活蛋白(Replication and transcription activator,RTA)主要由Y疱疹病毒立即早期基因ORF50所编码,是Y疱疹病毒中具有序列保守性的一个蛋白分子。作为病毒的“分子开关”,RTA可有效的激活病毒由潜伏状态进入裂解感染;在裂解感染过程中,RTA可以通过直接或间接的方式激活部分病毒早期基因的转录。在EBV和KSHV中,RTA激活基因转录的机制已研究的比较清楚,但在MHV-68中,尽管己报道有两个基因可被RTA激活转录,但RTA与基因启动子区域相互作用的具体机制目前仍不清楚。本研究发现在MHV-68左端基因组复制子区域内有两段高度同源的RTA结合序列:RREA和RREB。双荧光素酶报告实验证实RTA通过结合该序列可以显著增强下游基因的转录水平。(Add EMSA and Chipdata)在敲除RRE的MHV-68重组病毒感染细胞过程中,发现RREB对于基因ORF18的转录激活起到关键的作用;而RREA或RREB均能单独激活基因K3的转录。   本研究鉴定了两个依赖RTA转录激活的MHV-68基因,ORF18和K3。并首次阐明MHV-68 RTA可以通过直接结合基因启动子区内的RRE来激活基因转录;同时,通过构建RRE敲除病毒,在病毒感染水平证实了RTA对下游基因的转录激活。
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