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食用菌液体菌种具有生长速度快、活力强、质量均一、便于接种等优点,是工厂化生产食用菌的重要技术支撑。然而,目前关于杏鲍菇液体菌种发酵参数方面的研究相对较少,液体菌种菌丝活力变化方面的研究也有待进一步完善,不能有效指导生产实践。鉴于此,本研究采用响应面分析法对液体菌种配方及条件等参数进行优化,并通过向培养基中添加不同物质来探究菌丝活力的变化,旨在为杏鲍菇液体菌种生产及杏鲍菇工厂化生产提供理论依据。主要研究成果如下:
(1)液体培养基的最适碳源为葡萄糖、最适氮源为酵母膏。通过响应面试验设计优化出培养基最佳配方,结合操作实际,将其修正为:葡萄糖29.00g/L、酵母膏2.90g/L、KH2PO40.90g/L、MgSO41.00g/L。通过分析各因素对菌丝干重的影响,得出影响程度依次为葡萄糖、KH2PO4、酵母膏、MgSO4,其中前两项因素影响显著。葡萄糖与KH2PO4的交互作用对菌丝干重有明显的影响,葡萄糖与酵母膏的交互作用存在一定的影响。
(2)通过响应面试验设计优化出液体菌种最优培养条件,结合实际情况,将其修正为:装液量106.00mL/250mL、转速165.00r/min、温度23.60℃、初始pH6.70。通过分析各因素对菌丝干重的影响,得出影响程度依次为初始pH、装液量、温度、转速,其中前三项因素具有极显著影响。装液量与转速、温度与初始pH的交互作用对菌丝干重有明显的影响。
(3)添加物对菌丝活力影响研究表明,随着培养时间增加,超氧阴离子产生速率、H2O2浓度、相对电导率、MDA、可溶性蛋白和可溶性多糖含量上升,羟基自由基清除率、CAT、POD、APX和SOD活性、可溶性糖、可溶性氨基酸和脯氨酸含量下降。选取添加物VB1(促进菌丝活力)、NaCl(抑制菌丝活力),两种添加物对超氧阴离子产生速率、H2O2浓度、羟基自由基清除率、可溶性氨基酸含量、POD、APX和脱氢酶活性影响显著。在培养中后期,对相对电导率、MDA和可溶性多糖含量影响显著。此外,SOD活性仅受添加物NaCl影响显著,脯氨酸含量仅受添加物VB1影响显著。
(4)斯皮尔曼相关性分析表明,培养时间与超氧阴离子产生速率、H2O2浓度、相对电导率、MDA和可溶性蛋白含量显著正相关。羟基自由基清除率、CAT、POD、APX、SOD和脱氢酶活性、可溶性糖和可溶性氨基酸含量与培养时间显著负相关,与生长速度显著正相关。生长速度与H2O2浓度呈显著负相关。结合前面数据可推断出,H2O2浓度、羟基自由基清除率、可溶性氨基酸含量、POD、APX、SOD和脱氢酶活性是添加物对菌丝活力影响的重要评价指标。
(5)通径模型分析表明,SOD活性与菌丝干重变化的联系最为密切,羟基自由基清除率与菌丝生长速度的联系最为密切。理化因子之间存在相互影响,各个理化指标协同作用于菌丝干重和生长速度。
(1)液体培养基的最适碳源为葡萄糖、最适氮源为酵母膏。通过响应面试验设计优化出培养基最佳配方,结合操作实际,将其修正为:葡萄糖29.00g/L、酵母膏2.90g/L、KH2PO40.90g/L、MgSO41.00g/L。通过分析各因素对菌丝干重的影响,得出影响程度依次为葡萄糖、KH2PO4、酵母膏、MgSO4,其中前两项因素影响显著。葡萄糖与KH2PO4的交互作用对菌丝干重有明显的影响,葡萄糖与酵母膏的交互作用存在一定的影响。
(2)通过响应面试验设计优化出液体菌种最优培养条件,结合实际情况,将其修正为:装液量106.00mL/250mL、转速165.00r/min、温度23.60℃、初始pH6.70。通过分析各因素对菌丝干重的影响,得出影响程度依次为初始pH、装液量、温度、转速,其中前三项因素具有极显著影响。装液量与转速、温度与初始pH的交互作用对菌丝干重有明显的影响。
(3)添加物对菌丝活力影响研究表明,随着培养时间增加,超氧阴离子产生速率、H2O2浓度、相对电导率、MDA、可溶性蛋白和可溶性多糖含量上升,羟基自由基清除率、CAT、POD、APX和SOD活性、可溶性糖、可溶性氨基酸和脯氨酸含量下降。选取添加物VB1(促进菌丝活力)、NaCl(抑制菌丝活力),两种添加物对超氧阴离子产生速率、H2O2浓度、羟基自由基清除率、可溶性氨基酸含量、POD、APX和脱氢酶活性影响显著。在培养中后期,对相对电导率、MDA和可溶性多糖含量影响显著。此外,SOD活性仅受添加物NaCl影响显著,脯氨酸含量仅受添加物VB1影响显著。
(4)斯皮尔曼相关性分析表明,培养时间与超氧阴离子产生速率、H2O2浓度、相对电导率、MDA和可溶性蛋白含量显著正相关。羟基自由基清除率、CAT、POD、APX、SOD和脱氢酶活性、可溶性糖和可溶性氨基酸含量与培养时间显著负相关,与生长速度显著正相关。生长速度与H2O2浓度呈显著负相关。结合前面数据可推断出,H2O2浓度、羟基自由基清除率、可溶性氨基酸含量、POD、APX、SOD和脱氢酶活性是添加物对菌丝活力影响的重要评价指标。
(5)通径模型分析表明,SOD活性与菌丝干重变化的联系最为密切,羟基自由基清除率与菌丝生长速度的联系最为密切。理化因子之间存在相互影响,各个理化指标协同作用于菌丝干重和生长速度。