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背景与目的肝细胞性肝癌(hepatocellular carcinoma, HCC)是我国常见的恶性肿瘤之一,因其早期诊断困难、易发生转移,并缺乏有效的治疗方法,预后极差,死亡率高。故探讨肝细胞性肝癌的发生及转移机制,寻找有效预防及治疗的手段,是目前迫切需要解决的问题。HCC的发生、发展是一个多阶段、多基因参与的连续性过程,机制十分复杂。Ras同源基因(Rho)家族蛋白是一类与ras同源的小GTP结合蛋白,包括Rho (RhoA, RhoB, RhoC),Rac,Cdc42等家族成员,它循环于活性GTP结合型与失活性GDP结合型之间,作为分子开关控制细胞信号转导途径,产生多种生物学效应。RhoC (Ras homologous C)属于小分子G蛋白超家族中的Rho亚家族,亦是Rho信号转导通路的重要分子。文献报道,RhoC在肝癌、胃癌、结肠癌等多种恶性肿瘤中呈高表达,并与肿瘤的浸润转移高度相关。IQGAP1(IQ motif containing GTPase activating protein1)是一种Ras鸟苷三磷酸酶活化蛋白,因其含有类似于Ras GAPs催化域的广泛序列和位于N端的4个可与钙调蛋白相互作用的IQ模体而被命名。研究表明,IQGAP1通过多种转导通路在肝癌、胃癌、结肠癌等多种肿瘤的发生及转移中发挥了显著的促进作用,被认为是一种致癌基因。目前已有在胃癌中的研究发现,RhoC蛋白和IQGAP1蛋白均呈高表达,且二者呈正相关关系。但有关二者在肝癌中的表达情况尚无人报道。为了解二者在HCC发生、发展中的作用及各种可能的机制,本文通过观察HCC组织、癌旁组织和正常肝组织中RhoC和IQGAP1的表达情况以及二者与HCC临床病理特征的关系,初步探讨RhoC和IQGAP1在HCC组织中的相关性。方法随机取郑州大学第一附属医院2010年3月-2011年3月手术切除的56例肝癌标本。肝癌患者中男48例,女8例,年龄34-65岁。术前均未接受化疗放疗及免疫治疗,病理学均确诊为原发性肝细胞癌,其中高分化癌14例,中分化癌22例,低分化癌20例；有门脉浸润14例,无浸润42例；TNM分期参照AJCC肝癌肿瘤分期标准,Ⅰ～Ⅱ期17例,Ⅲ～Ⅳ期39例；肿瘤大于或等于5cm者22例,小于5cm者34例。随机选25例性别与年龄构成与上述无显著差异并经病理学证实为肝硬化的癌旁组织做对照,另选15例同期肝血管瘤旁病理证实为正常肝组织的组织为正常对照。以上所有标本组织均经过甲醛溶液固定,石蜡包埋,4μm厚连续切片。载玻片经泡酸、高温灭菌及多聚赖氨酸涂片处理。采用免疫组化PV-9000二步法,具体步骤参照试剂盒说明。用PBS代替一抗做阴性对照。以已知的RhoC和IQGAP1阳性切片作为阳性对照。结果采用SPSS17.0软件分析数据,对HCC组织、癌旁组织及正常组织中RhoC和IQGAP1的差异性采用χ2检验和Fisher确切概率法,对HCC组织中二者的相关性行spearman相关分析,以α=0.05作为检验水准。结果1、RhoC表达与HCC临床病理因素的关系RhoC阳性染色主要定位于细胞浆,呈弥漫性或灶性分布,以弥漫性为主。RhoC在HCC组织、癌旁组织及正常肝组织中的阳性表达率分别为66.1%、40.0%、20.0%,RhoC在HCC中的阳性表达高于癌旁组织(χ2=4.824,P=0.028)及正常肝组织(χ2=10.209,P=0.001),且三者比较具有显著性差异(χ2=12.040,P=0.002)。HCC组织中RhoC在高分化组、中分化组和低分化组中的阳性表达率分别为28.6%、63.6%和95.0%。RhoC在低分化组织中的阳性表达高于中分化组织(Fisher确切概率法,P=0.022)及高分化组(χ2=13.708,P=0.000),且三者比较具有显著性差异(χ2=16.307,P<0.001)。HCC组织中RhoC在临床分期Ⅰ～Ⅱ组与Ⅲ-Ⅳ组的阳性率分别为35.3%与79.5%,两者的差异性比较具有统计学意义(χ2=10.315,P=0.001)。HCC组织中有门脉浸润组RhoC的表达显著高于无门脉浸润组(92.9%vs57.1%),两组的差异具有统计学意义(χ2=4.487,P=0.034)。HCC组织中RhoC的表达与性别、年龄、肿瘤大小无关(均P>0.05)2、IQGAP1表达与HCC临床病理因素的关系IQGAP1的阳性染色主要定位于细胞浆或细胞膜,呈弥漫分布。IQGAP1在HCC组织、癌旁组织及正常肝组织中的阳性表达率分别为75.0%、44.0%、13.3%；IQGAP1在HCC组织中的阳性表达显著高于癌旁组织(χ2=7.343,P=0.007),而在癌旁组织中的表达高于正常组织(χ2=2.743,P=0.098),且三者比较差异具有统计学意义(χ2=20.828,P<0.001)。HCC组织中IQGAP1在高、中、低分化组织中的阳性表达率分别为42.9%、77.3%、95.0%,三者比较具有显著差异(χ2=12.042,P=0.002)。HCC组织中IQGAP1在临床分期Ⅰ～Ⅱ组与Ⅲ-Ⅳ组的阳性率分别为47.1%与87.2%,两者的差异性比较具有统计学意义(χ2=8.137,P=0.004)。HCC组织中有门脉浸润组IQGAP1的表达显著高于无门脉浸润组(92.9%vs57.1%),两组的差异具有统计学意义(χ2=4.571,P=-0.033)。HCC组织中IQGAP1的表达与性别、年龄、肿瘤大小无关(均P>0.05)3、HCC组织中RhoC表达与IQGAP1表达的相关关系经spearman相关分析得出,HCC组织中RhoC与IQGAP1的表达呈正相关,χ2=19.357r=0.631,P<0.001。结论1、RhoC和IQGAP1均在HCC中高表达,且与HCC的发生、侵袭转移密切相关。2、RhoC和IQGAP1在HCC的侵袭转移中可能起着协同作用。3、联合检测RhoC和IQGAP1蛋白对HCC的早期诊断可能有一定的参考价值。